HEK293F+细胞瞬时表达+PDGFR-β／Fc蛋白的条件优化.pdf

第５４卷　第５ 期 中山大学学报 （自然科学版） Ｖｏｌ５４　Ｎｏ５ 　 ２０１５ 年　９ 月 ＡＣＴＡ　ＳＣＩＥＮＴＩＡＲＵＭ　ＮＡＴＵＲＡＬＩＵＭ　ＵＮＩＶＥＲＳＩＴＡＴＩＳ　ＳＵＮＹＡＴＳＥＮＩ Ｓｅｐ　２０１５ 　 ＤＯＩ：１０１３４７１／ｊｃｎｋｉａｃｔａｓｎｕｓ２０１５０５０１９ ＨＥＫ２９３Ｆ细胞瞬时表达 ＰＤＧＦＲ／Ｆｃ β 蛋白的条件优化 洪　坡，袁凤媚，黄嘉慧，刘东晨，张　途，谢秋玲 （暨南大学生命科学技术学院 广东省生物工程药物重点实验室 ∥ ∥ 基因工程药物国家工程研究中心，广东广州５１０６３２） 摘　要：为优化ＨＥＫ２９３Ｆ细胞瞬时转染条件，提高ＰＤＧＦＲ的蛋白表达量，采用聚乙烯亚胺 （Ｐｏｌｙｅｔｈｅｒｉｍｉｄｅ， β ＰＥＩ）为转染试剂，将质粒ｐＸＬＧＰＤＧＦＲ／Ｆｃ与ＰＥＩ混匀聚合后加入到细胞悬液，３７ ℃， ＝６％ ＣＯ ，１８０ ｒ／ β φ ２ ｍｉｎ悬浮振荡培养，培养７ ｄ 后收集样品，ＥＬＩＳＡ 检测 ＰＤＧＦＲ蛋白的浓度。对细胞密度、ＤＮＡ 浓度和 ｍ β （ＤＮＡ）：ｍ （ＰＥＩ）、聚合时间以及添加物 （丙戊酸钠、葡萄糖和蛋白胨）进行优化。结果显示，ＨＥＫ２９３Ｆ细胞 瞬时转染的最佳条件为：细胞密度４×１０ ｃｅｌｌｓ／ｍＬ、ＤＮＡ浓度２０ ｇ／１０ ｃｅｌｌｓ、ｍ （ＤＮＡ）：ｍ （ＰＥＩ）为１：２、６ ６ μ 聚合时间５ ｍｉｎ。同时，４８ ｈ 内添加３ ｍｍｏｌ／Ｌ 丙戊酸钠，第３天补加葡萄糖和１ ｇ／Ｌ 的蛋白胨ＴＮ１ 可使ＰＤＧＦＲ ／Ｆｃ 的蛋白表达量明显提高。实验表明，经过对ＨＥＫ２９３Ｆ细胞瞬时表达ＰＤＧＦＲ的转染条件的优化，蛋白表 β β 达量可达５５ ｍｇ／Ｌ，为更大规模瞬时转染生产ＰＤＧＦＲ／Ｆｃ蛋白奠定了基础。 β 关键词：ＰＤＧＦＲ／Ｆｃ；ＨＥＫ２９３Ｆ细胞；瞬时表达 β 中图分类号：Ｑ７８　　文献标志码：Ａ　　文章编号：０５２９ －６５７９ （２０１５）０５ －００９６ －０６ Ｃｏｎｄｉｔｉｏｎ Ｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎ ｏｆＰＤＧＦＲ／Ｆｃ Ｔｒａｎｓｉｅｎｔ β Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎ ＨＥＫ２９３Ｆ Ｃｅｌｌｓ ＨＯＮＧＰｏ，ＹＵＡＮＦｅｎｇｍｅｉ，ＨＵＡＮＧＪｉａｈｕｉ，ＬＩＵＤｏｎｇｃｈｅｎ，ＺＨＡＮＧ Ｔｕ，ＸＩＥ Ｑｉｕｌｉｎｇ （Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆＬｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ Ｐｒｏｖｉｎｃｉａｌ Ｋｅｙ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｏｆ Ｂｉｏｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｃｅｎ