DDAHADMA系统调节内皮细胞组织因子表达作用及机制的研究.pdf

摘要 出血是急性白血病早期多见的临床表现，也是急性白血病死亡的 首要原因。危及生命的出血的发生与白血病细胞所致的组织因子(TF) 水平升高有关。白血病细胞除了在其细胞膜上表达大量盯抗原外，还 可与内皮细胞相互作用诱导内皮细胞表达TF，导致白血病患者的凝血 功能紊乱。此外，白血病患者极易合并和(或)继发细菌感染，而常 见的感染致病菌中的脂多糖(LPS)成份可显著增强内皮细胞11F的活 性及其表达，从而激活Ⅱ介导的凝血途径，导致弥散性血管内凝血 (DIC)的发生。 一氧化氮(No)是维持血管内皮功能最重要的一种介质，由一 氧化氮合酶(NOS)催化L．精氨酸生成，发挥舒张血管、抗炎、抗 血栓形成等多种生物学功能。近期研究显示，体内存在内源性NOS 抑制物如非对称二甲基精氨酸(触)MA)，其在体内和体外均可抑制 No的合成，导致内皮功能不全。在一些心血管疾病中，血浆朋弧嗄A 浓度显著升高，且与病理性血栓形成等凝血功能紊乱的发生发展密切 相关。但是急性白血病患者血浆舢孙队水平如何，是否与急性白血 病患者凝血功能紊乱有关在国内外尚未见报道。先前研究显示内源性 No可抑制内毒素或单核细胞诱导的内皮细胞TF的表达。二甲基精 氨酸一二甲胺水解酶(DDJAH)是趟)MA的特异性水解酶，在调节 组织和细胞内朋孙疽A水平中起关键作用。因此，DDAH，ADMA通路 被认为是一个调节内源性No生成和内皮功能的新系统。那么， DDA聊ADMA通路是否参与了白血病细胞及LPS诱导内皮细胞表达 TF中的作用也是本研究要讨论的内容。 全反式维甲酸(触限A)是治疗急性早幼粒细胞白血病(剐PL) 的首选药物，可迅速缓解白血病患者的凝血功能紊乱。新近报道 A瞰可上调内皮细胞D】)AHm】RNA的表达，增加内源性No的生 成。去甲基雏菊叶龙胆酮(D岫)是从中草药川东獐牙菜中提取出 来的一种主要的口山酮化合物，具有多种药理学活性。在氧化应激和 炎症因素存在时，DMB可通过改善DDAH活性，降低舢)MA水平 发挥保护内皮细胞功能的作用。先前研究显示口山酮化合物在内毒素 中的作用以及该作用是否与调节DDAWADMA通路有关进行了探 讨。 基于上述设想，本研究对以下二个方面进行了探讨：(1)检测 舢)MA水平与血浆11P在急性白血病患者中的表达，并在白血病细胞 与内皮细胞细胞共培养模型中探讨DDAH伪m嗄A通路对白血病细胞 通路在LPS诱导内皮细胞表达TF的作用，及其在口山酮抑制LPS诱 导内皮细胞表达TF中的作用。 方法(1)选择121例急性白血病患者，健康对照组20例。(2) 培养人脐静脉内皮细胞株(H【ⅣECs)和急性粒细胞白血病细胞株 cⅨ叮A表达质粒，脂质体法转染HIⅣECs获得过表达DD√址12的内皮 细胞。(4)高效液相色谱法(m，LC)测定血浆及细胞培养上清液中 剐弧压A的含量；通过测定被酶代谢掉的舢孙谯的量评价内皮细胞 m鼢认水平。(9)W．estem 分析核因子一1cB(NF柚)的ⅨqA结合活性。 结果(1)初治急性白血病患者血浆舢孙执水平及TF抗原表 低(PO．01)；未缓解组和完全缓解组血浆舢孙tA水平明显低于初 O．01)；初治急性白血病患者血浆知)~认水平与血浆TF抗原表达 混合细胞TF促凝活性显著增高，且增加的促凝活性来自于内皮细胞 增强共培养所致TF活性及nl】睑IA表达上调的作用；相反，过表达 Ⅱ (10-7M～10-5 M)预处理内皮细胞可呈浓度依赖性地抑制共培养上 清诱导内皮细胞Ⅱ活性及mRN^的表达，上调D1)舭{2mRNA的表 达。 mRNA表达的作用，相反L．精氨酸(50mM)、过表达DDAH2及 生成并激活NF相，其作用可被Al弧俄(1州)增强，被L精氨酸 (50InM)、过表达DD_dU眩与DMB抑制。 结论(1)急性白血病患者血浆灿孙压A水平显著升高，并与TF 表达呈正相关，提示内源性削)MA含量升高可能是急性白血病患者 病细胞诱导内皮细胞TF的表达，其作用与调节细胞内Ca2+信号有关。 制LPS诱导的Ⅱ表达。 关键词 内皮细胞，非对称二甲基精氨酸，二甲基精氨酸一二甲胺水 解酶，组织因子，脂多糖 Ⅲ ABSTRACT is