DMT1参和β淀粉样前体蛋白表达和Aβ分泌的机制的研究.pdf

·中文论著摘要· DMTl参与p．淀粉样前体蛋白表达 和AD分泌的机制研究 刖 罱 阿尔茨海默病(Alzheimer’sdisease，AD)是一种发生于老年及老年前期的以 进行性痴呆为主要特征的神经系统退行性疾病，其主要临床特征是进行性记忆丧 失、认知缺陷及严重的精神障碍。AD的一个主要病理学标志是脑部出现淀粉样沉 积，即老年斑(senil 基构成的小神经肽—-Ap(13-amyloid precursor 理状态下，人脑内存在纳摩尔级浓度的可溶性A13，对神经元具有神经营养作用。 但在AD时，APP的异常剪切加工、Ap的形成及其从可溶状态到不溶状态的转变 是AD发病机制中的关键环节，近年来的研究表明铁、铜和锌等金属离子与APP、 p．分泌酶、丫-分泌酶和Tau蛋白的基因表达密切相关，从而参与Ap分泌、沉积。 以金属离子及金属离子转运蛋白为切入点，解析AD发病机制并寻找AD治疗靶 点已经成为AD治疗学的热点之一。 metal 二价金属离子转运体(divalent transporter1，DMTl)属于自然抵抗相 mRNA的3’端 关的巨噬细胞蛋白家族。DMTl蛋白有12个跨膜域，根据DMTl 非翻译区(3’一untranslational 均定位于细胞膜和胞内循环的内吞小泡膜上，参与多种二价金属离子尤其是铁离 子的转运，是维持细胞内二价金属离子稳态的重要金属转运蛋白之一。近年来有 关DMTl与神经退行性疾病发病机理的研究引入关注，通过对帕金森病 (Parki：nson 和黑质神经元死亡。令人感兴趣的是老龄大鼠脑内DMTI表达呈年龄性增高趋势； 多种炎症因子也能使DMTl在脑内表达上调，这两种情况均是诱发AD的重要危 险因素。然而，有关DMTl与AD发病机理的研究尚未见报道。 表达变化、定位分布及与AB的相关性进行系统分析，应用RNA干扰技术(RNA 探讨脑金属代谢紊乱与AD病理生理机制具有重要意义。 实验方法 Laser 显微技术(ConfocalScanning Blot APP／PSl小鼠脑内的定位分布及其与AD在老年斑内的位置关系，应用Western eDNA和空 和Ap的蛋白相关性，应用RNAi技术阻抑DMTl基因在稳定转染APPsw 质粒neo的SH-SY5Y细胞的表达，并应用WesternBlot技术检测RN刖对DMTl的基 Blot技术、 因沉默效果，应用CalceinAM荧光褪色光度法、RT．PCR技术、Western APP表达、Ap分泌和细胞生存率的影响。 实验结果 一、DMTl异常分布和表达参与AID发生的在体研究 l、DMTl在AD病人及APP／PSl转基因小鼠脑内的分布 棕黄色，在大脑皮层及海马内均可见DMTl阳性的老年斑分布了斑块大小不等， 形状为圆形或不规则形状，边界较清晰。高倍镜下可见DMTI．IRE和 2 变性的血管壁及其周围。 免疫荧光双标的共聚焦激光扫描结果显示，在AD病人和APP／PSI转基因小 鼠脑内，Ap免疫阳性的老年斑广泛分布于大脑皮层及海马，几乎所有A13阳性的 老年斑均有不同程度的DMTl表达，即DMTl和Ap共存于老年斑内。高倍镜观 DMTI-nonlRE在整个老年斑内均有分布，中心部位免疫阳性反应最强。而且 DMT-IRE免疫荧光除了分布在老年斑中，还可见于淀粉样变性的血管壁及其周 围。 2、DMTl在APP／PSI转基因小鼠大脑皮层及海马内的表达变化 Wcstcm 的表