复方“别敏”中黄芩苷—淫羊藿苷—黄芪甲苷配伍比例的优化的研究.pdf

复方“别敏”中黄芩苷．淫羊藿苷-黄芪甲苷配伍比鲤鳆垡丝翌塞 复旦盔堂亟±堑窒生堂垡迨塞 复方“别敏，，中黄芩苷．淫羊藿苷-黄芪甲苷配伍比例的优化研究 中文摘要 背景：变应性鼻炎是鼻黏膜的慢性炎性反应性疾病，全球约有10％-25％的人罹 患该病，发病率呈逐年增高趋势，且变应性鼻炎是继发哮喘的重要危险因素。 中医药在防治变应性鼻炎方面具有悠久的历史和独特的优势。中药复方“别敏” 是本课题组自拟的治疗变应性鼻炎的有效方剂，由黄芪、黄芩、淫羊藿、防风、 五味子、乌梅肉、银杏叶、补骨脂、白芷、地黄、黄精11味中药组成，扶正 与祛邪并举，融收敛于发散之中，突出显示了传统中医药治疗变应性鼻炎的特 色。经澳大利亚悉尼大学随机、双盲、安慰剂对照临床实验证实，“别敏”在改 善变应性鼻炎患者临床症状、降低血清IgE水平等作用方面疗效确切。随后十 多年的实验研究进一步揭示，“别敏”可通过调节机体内分泌、免疫功能发挥治 疗作用。我们的前期研究还发现，“别敏”中的单体成分黄芩苷、淫羊藿苷和黄 芪甲苷亦可调节免疫功能。中药复方配伍需遵守组方规则及合适的配伍比例。 作为“别敏”中抗变应性炎症的已知主要单体成分，黄芩苷、淫羊藿苷、黄芪 甲苷按照何种比例配伍可提高疗效、降低用量是一个有重要价值的问题，但没 有相关研究。因此本研究旨在明确该比例，并为探索中药单体小复方的研究模 式打下基础。 目的：优化复方“别敏”中黄芩苷(BA)、淫羊藿苷(ICA)与黄芪甲苷(ASI) 三种有效成分合用的配伍比例。 方法：首先采用Balb／c小鼠卵清蛋白腹腔注射和滴鼻攻击建立变应性鼻炎小鼠 模型。造模结束后，无菌取脾，分离脾脏淋巴细胞，进行体外培养，将细胞分 为对照组、ConA组(用ConA刺激)、黄芩苷、淫羊藿苷和黄芪甲苷不同浓度 组，以脾淋巴细胞增殖反应为指标，利用XTT法分别确定黄芩苷、淫羊藿苷、 黄芪甲苷的有效剂量范围；其次选用U‘lo(108)表组方设计所得的10种中药组合 进行干预，将脾淋巴细胞分为对照组、ConA组、不同中药剂量组合组，考察 不同中药剂量组合对脾淋巴细胞增殖的抑制效应，结果经逐步回归统计分析， 得出回归方程，通过网格法求得三成分合用的优化配比；最后以此配伍分别与 黄芩苷、淫羊藿苷和黄芪甲苷比较，利用淋巴细胞增殖反应和IL-4、IL一5、IFN— Y细胞因子水平检测对上述优化配伍结果进行验证。 结果：在确定三种有效成分各自有效剂量范围的研究中，ConA组OD值明显高 4 复方“别敏”中黄芩苷．淫羊藿苷-黄芪甲苷醒鱼幽垡丝婴塞 复旦盔堂亟±堑塞生堂垡i垒塞 1．tM)OD 于对照组(氏0．01)，黄芩苷和黄芪甲苷在极低浓度时(0．003-0．016 laM， 值较ConA组高(P0．05或P0．01)，当黄芩苷或淫羊藿苷浓度达到2～10 黄芪甲苷浓度达1--10 围内明显抑制致敏小鼠脾淋巴细胞增殖。 在寻找三种有效成分优化配伍比例的研究中，均匀实验各剂量组对脾淋巴 细胞增殖反应的影响经逐步回归分析统计，拟合回归方程：OD值=—59．59659 归方程经F检验，具有统计学意义(尸0．01)。由于OD值最小时表明三成分合 用对脾淋巴细胞增殖反应的抑制最明显，通过网格法求极值，得出B=6．231aM， 量比为1：2．14：2．65时，抑制效应最明显。通过分别求OD值对黄芩苷、淫羊 藿苷、黄芪甲苷浓度的偏导数，发现三种有效成分依上述比例合用时，淫羊藿 苷起主要作用，黄芩苷的作用稍弱，而黄芪甲苷的作用最小。 验证研究显示，在淋巴细胞增殖反应中，ConA组OD值较对照组显著增高 (尸0．01)，黄芩苷组、淫羊藿苷组、黄芪甲苷组分别采用与优化配伍组中各成 分相同的剂量，但优化配伍组抑制淋巴细胞增殖的效果明显优于各有效成分单 IL一5、IFN—Y水平均高于对照组(pO．01)；黄芩苷组、淫羊藿苷组、黄芪甲苷 的调节作用又明显优于黄芩昔、淫羊藿苷、黄芪甲苷单用(尸O．05或P0．01)。 结论：复方“别敏”中主要有效成分黄芩苷、淫羊藿苷、黄芪甲苷按优化比例 合用可有