选DNA重组技术的基本工具.pptVIP

* 基因工程 细胞工程 （克隆技术） 胚胎工程 生态工程 生物技术的安全性和伦理问题 选修3 现代生物科技专题 基本原理 应用实例 选修3具体内容要求标准特点： 知识性目标：以了解水平为主； （“简述” 、“举例说出”） 情感性目标：以感受水平为主； （“关注”） 技能性目标：以资料收集、交流讨论 为主。 基因工程诞生的技术突破 1. 基因转移载体的发现 1967年，罗斯(Roth)、 赫林斯基(Hrlinski) 发现 细菌拟核DNA之外的 质粒有自我复制能力， 并可以在细菌细胞间 转移，此发现为基因 转移找到了一种运载工具。 限制酶——1970年，史密斯H.C. Smith等分离出第一种限制性（核酸）内切酶。 1978年 Nobel 生理或医学奖 基因工程诞生的技术突破 2. 工具酶的发现 基因工程诞生的技术突破 2. 工具酶的发现 DNA连接酶1967年，5个实验室几乎同时发现了DNA连接酶。 这些发现，为DNA的切割、连接及功能基因的获得创造了条件 1975年，英国弗雷德里克·桑格F. Sanger和美国沃尔特·吉尔伯特W. Gilbert分别发明了DNA快速测序技术 1980年Nobel化学奖 基因工程诞生的技术突破 3. DNA测序、合成技术的发明 1975年，英国弗雷德里克·桑格F. Sanger和美国沃尔特·吉尔伯特W. Gilbert分别发明了DNA快速测序技术 基因工程诞生的技术突破 3. DNA测序、合成技术的发明 之后，人们又发明了DNA合成仪。 1980年Nobel化学奖 1972年，斯坦福大学的伯格P.Berg小组完成了首次体外重组实验——开创性实验 将猿猴病毒SV40的DNA片断 与 ?噬菌体的DNA片断连接起来。诞生了世界上第一个人工DNA重组产物。 基因工程诞生的技术突破 4. DNA体外重组的实现 1973年，斯坦福大学的博耶H.Boyer、科恩S. Cohen将含有卡那霉素抗性基因的大肠杆菌R6-5质粒与含有四环素抗性基因的另一种大肠杆菌质粒pSC101连接成重组质粒，具有双重抗药性。 基因工程诞生的技术突破 2. Boyer-Cohen实验 ——重组DNA表达实验的成功 后来，又把非洲爪蟾的核糖体基因片断同pSC101质粒重组，转入大肠杆菌，并在菌体内成功转录出相应的mRNA。这是第一次成功的基因克隆实验。 基因工程诞生的技术突破 2. Boyer-Cohen实验 ——重组DNA表达实验的成功 1986年 Nobel生理或医学奖 基因工程的概念 原理： 1.基因是什么？（获取目的基因的前提） 基因是独立的有遗传效应的DNA片段 2.不同生物的基因为什么能拼接？ 从基因结构的共性分析 共同的双螺旋结构 3.同一基因在不同生物的细胞内为什么能表达出相同的蛋白质？ 从基因功能的共性分析 生物共用一套遗传密码 基因工程 别名 操作环境 操作对象 操作水平 基本过程 结果 实质 基因拼接技术 或 DNA重组技术 生物体外 基因 DNA分子水平 人类需要的基因产物 剪切 →拼接 →导入 →表达 基因重组 步骤一工具： 步骤二工具： 步骤三工具： DNA的“分子手术刀” ——限制性核酸内切酶 DNA的“分子缝合针” ——DNA连接酶 基因的“分子运输车” ——载体 基因的大小以纳米计算，要对它进行剪切、拼接等操作，没有非常精细的工具是不行的。进行基因操作最少需要以下三种工具： 1.1 DNA重组技术的工具 一、限制性核酸内切酶（限制酶） ——“分子手术刀” 1.来源: 2.种类: 3.作用： 主要原核生物 4000种 专一性 识别双链DNA 分子的某种特定的核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开。 黏性末端 当限制酶从识别序列的中心轴线两侧切开时，被限制酶切开的DNA两条单链的切口，带有几个伸出的核苷酸，他们之间正好互补配对，这样的切口叫黏性末端。 当限制酶从识别序列的中心轴线处切开时，切开的DNA两条单链的切口平整的，这样的切口叫平末端。 平末端 1.1 DNA重组技术的工具一、限制性核酸内切酶（限制酶） ——“分子手术刀” 1.来源: 2.种类: 3.作用： 4.结果: 主要原核生物 4000种 专一性 形成两种末端： 黏性末端 平末端 要想获得某个特定性状的基因必须要用 限制酶切几个切口？可产生几个黏性末端？ 要切两个切口，产生四个黏性末端 如何把两种来源不同的DNA片段连接起来？ 用 同一种限制酶 来分别切割， 会产生相同的黏性末端，然后让两者的黏性末端黏合起来，就似乎可以合成重组