副鸡禽杆菌免疫优势模拟表位的鉴定及其免疫原性分析.pdf

摘要 性疾病。副鸡禽杆菌有A、B、C三种血清型，其有效保护性抗原成分至今尚不明了．本文利用 原核表达系统成功表达了副鸡禽杆菌三个血清型菌株的血凝素蛋白，并分析了重组血凝素蛋白的 免疫原性；应用噬菌体肽库技术筛选和鉴定出副鸡禽杆菌的2个免疫优势模拟抗原表位，分析了 模拟抗原表位的免疫原性，研究结果为进一步研制与开发鸡传染性鼻炎新型疫苗奠定了基础。 列，分别设计特异性引物，采用PCR技术扩增出副鸡禽杆菌三种血清型菌株的血凝素基因，序 列测定结果表明，三种血清型的血凝素基因全长分别为l035bp、l038bp和l026bp。分别将PCR 菌阳性血清特异性结合，并且都具有凝集鸡红细胞的活性．用纯化的重组血凝素作为免疫原分别 免疫鸡，其血凝抑制抗体滴度均达到l：10以上；用相应菌株攻毒后，部分免疫鸡获得了保护， 大部分试验鸡出现鼻炎症状，三种重组血凝素的保护率分别为3110，2110和2／10。由此表明，重 组血凝素蛋白具有良好的免疫原性，但不能诱导足够的免疫保护。结果提示，血凝素可能不是副 鸡禽杆菌的惟一保护性抗原。 位，结果发现在血凝素蛋白的第86位氮基酸和第186位氨基酸的附近区域可能是2个表位区， 抗原抗体结合试验表明，构建的重组菌不具有与副鸡禽杆菌抗体结合活性，提示选定的2个血凝 素蛋白的线性抗原肽缺乏免疫活性。 利_}fj噬菌体随机12肽库，以A型副鸡禽杆I寄多克隆抗体和c型副鸡禽杆菌单克隆抗体纯化 lgO筛选。结果表明，用多抗筛选获得的噬菌体克隆中，50％具有核心氨基酸序列A．DP(M)L， 单抗筛选获得的噬菌体克隆中，80％以上带有共有氨基酸序列Y-P-Q(A)ww。含有上述共有序列 的噬菌体克隆不仅可以与抗体特异结合，并与副鸡禽杆菌抗原竞争结合抗体。将编码 并在鞭毛上成功展示，构建的重组菌能与相应抗体特异结合。用2个重组菌免疫鸡产生的相应抗 疫鸡分别获得了4／8和3／8的免疫保护。结果提示，鉴定山的副鸡禽杆菌的2个免疫优势模拟表 位可作为候选表位，具有研制与开发鸡传染性鼻炎新型疫苗的满力。 关键词：副鸡禽杆菌；血凝素；原核表达；模拟表位；免疫原性 Abstract Infectious Avibacterium oneofthe coryza(IC)，caused by paragallinarum(Apg),isimportant fur bacterialdisease hasbeenclassifiedinto Cserovars． poultry．AvibaeteriumparagallinarumA，B，and of havenot been identified．Inthis The this yet clearly dissertation，the protectiveantigenspathogen of were thethreeserovars clonedand haemagglutiningenes successfully expressed．The ofthe was immunodominant immunogenicityexpressedproductsidentified，respectively．Two were means andtheir screened of were mimotopes by phagedisplaytechnique immunog