乳牙高龋和变链菌胞外多糖及其gtf基因多态性关系初步的研究.pdfVIP

：!!!查堂堡：!丝苎 !!堑壹塑量变壁堕望丛兰塑墨!堡茎里兰查堡叁墨塑!!!堕 乳牙高龋与变链菌胞外多糖及gtf基因多态性关系初步研究 专 业：口腔临床医学 硕士研究生：支清蕙 导 师：林焕彩主任医师 摘 要 目的： 采用分子流行病学和分子生物学的方法，从高龋无龋儿童口腔菌斑中分离 鉴定出变形链球菌和远缘链球菌，进行变形链球菌临床分离株细胞外多糖产量 的定量检测并探讨多糖产量与乳牙龋的关系，用PCR-RFLP的方法初步探讨变 形链球菌葡糖基转移酶的遗传多态性与乳牙龋的关系。 方法： 采用随机整群抽样方法，对从化市7间幼儿园所有小班日托幼儿共401名 进行乳牙龋病的流行病学调查，从高龋儿童中随机抽取20名儿童作为研究对 象，按照年龄性别匹配原则从无龋儿童中抽取20名儿童作为对照。 采集高龋无龋儿童乳磨牙颊面菌斑，应用选择性培养基、形态学和生化鉴 定进行临床菌斑中变形链球菌和远缘链球菌的分离和初步鉴定，应用AP-PCR 的方法对变形链球菌和远缘链球菌作进一步的鉴定并区分变形链球菌的 AP．PCR基因分型。 用蒽酮法测定不同基因型变形链球菌细胞外多糖产量，分析细胞外多糖产 量与患龋状况的关系。 选取高龋组合成水不溶性葡聚糖量最高的15株和无龋组合成水不溶性葡 聚糖量最低的15株变形链球菌作为葡糖基转移酶基因遗传多态性的研究对象； I、 首先设计引物PCR扩增gtfBC基因片断，然后以三种限制性内切酶Mbo Taq I、HinfI对gtfBC基因片断分别进行酶切，分析酶切产物与患龋状况的关 乳牙高龋与变链菌胞外多糖及gtf基区J多态|生1)：=系初步研究 系。 结果： 从高龋组和无龋组各20名儿童口腔菌斑中分离的120株绌菌中，91株变 形链球菌(其中高龋组47株，无龋组44株)，9株远缘链球菌，20株既不是 变形链球菌也不是远缘链球菌。高龋组变链菌和远缘菌的检山率均高于无龋组， 差异有统计学意义。APPCR分型结果显示，91株变形链球菌可区分为43种基 因型，其中高龋组有31种基因型，无龋组有19种基因型。 细胞外多糖产量定量检测显示，高龋组变形链球荫合成水溶性和水一i溶性 葡聚糖能力均明显高于无龋组，高龋组个体定植的合成水溶性及水不溶性葡聚 糖能力强的菌株所占比例也明显高于无龋组，差异有统计学意义。 I酶切可 PCR—RFLP的结果显示，标准菌株UAl．59的gtfBC基因片断经Taq 巾除无龋组有一株临床株与UAl59不同外，其余均为此种带型。UAl59的Mbo I酶切图谱可观察到的三条较长片断为650bp、600bp和450bp，所有临床菌株 I酶切图谱可观察到的三 与该标准菌株的酶切图谱未出现差异。UAl59的Hinf 的酶切图谱完全一致，另一种的最长片断约为2100bp，其余两条长片段与UAl59 相同。高龋组15株临床菌株中有5株与UAl59酶剀图谱一致，无龋组15株临 床菌株中有3株与UM59酶切图谱一致。高龋组与无龋组三种酶切图谱的差别 没有统计学意义。 结论： 1．AP．PCR可以简便准确地鉴别变链菌和远缘菌，用该法检测发现高龋儿童变 链菌和远缘菌检出率均明显高于无龋儿童。 2．高龋组变链菌合成水溶性与水一i溶性葡聚糖能力均高于无龋组，提示乳牙龋 的发生与变链菌的细胞外多糖合成能力密切相关。 I、Hinf 3．-re限制性内切酶(Mbo I)对高龋无龋儿童变链菌临床分 I、Tsq 离株的gtfBC基因进行酶忉J，HinfI的酶切图谱在两组儿童间存在差别，但 中山