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交换反应的平衡常数即选择性系数： KA、 KB为A、B的分配系数。 KA/B是离子对树脂亲和能力相对大小的度量，KA/B越大，A的交换能力大，与树脂结合力强，在树脂柱上的保留时间长，越易保留，后流出色谱柱。 所以混合试样中各组份在两相间的分配系数不同仍是离子交换树脂分离的先决条件。 常选择某种离子（如H+或Cl－）作参考。 固定相为离子交换剂(ion exchanger)： 离子交换树脂和硅胶化学键合离子交换剂。 1、离子交换树脂: 有网状骨架及可离解、可交换基团，如磺酸基 (－SO3H ) 、羧基 (－COOH)[阳离子交换树脂]及季胺基 (－NR3+OH－)[阴离子交换树脂]等。 特点：易膨胀、传质慢、柱效低、不耐压 性能指标：交联度、交换容量和粒度等。 固定相 典型的离子交换树脂是由苯乙烯和二乙烯苯交联共聚而成。二乙烯苯起到交联和加牢整个结构的作用，其含量用于表示树脂的交联度。交联度大，形成网状结构紧密，网眼小，选择性高。一般用途时，选8％交联度的阳离子交换树脂，4％的阴离子交换树脂为宜 指每克树脂能参加交换反应的活性基团数。它决定于网状结构内所含有的酸性或碱性基团的数目。因此它反映了离子交换树脂进行交换反应的能力。 通常以每克干树脂或每毫升溶胀后的树脂能交换离子的毫摩尔数表示。单位为m mol/g 或m mol/ml。 指离子交换树脂颗粒的大小。一般以溶胀态所能通过的筛孔来表示。分析用树脂采用通过100～200目筛 离子交换树脂的选择 交联度 交换容量 粒度 2、化学键合离子交换剂： 把离子交换基团键合在薄壳型和全多孔微粒硅胶上。可用于HPLC中的固定相。 特点：机械强度高、耐高压、不溶胀、传质快、柱效高 一定pH值和离子强度的缓冲溶液，有时也加入少量有机溶剂，如乙醇、四氢呋喃、乙腈等，以提高选择性。 流动相 对于强离子型离子交换树脂，交换能力不随pH值变化，弱离子型离子交换树脂的交换能力随pH变化。 例如，分离I-,Cl-,用F-作为流动相 被分离离子、离子交换剂、流动相的性质等 (1) 离子的电荷和水合半径：价态高分配系数K大。同价阳离子在酸性阳离子交换剂上,水合离子半径增大, 分配系数小。 稀溶液中阳离子在强酸性阳离子交换树脂上的交换顺序是： 　　Fe3+＞Al3+＞Ba2+≥Pb2+＞Sr2+＞Ca2+＞Ni2+＞Cd2+ ≥ Cu2+≥ Co2+≥Mg2+≥Zn2+≥Mn2+＞Ag+＞Cs+＞Rb+＞K+≥NH4+＞Na+＞H+＞Li+ 影响保留行为的因素 常见阴离子在强碱性阴离子交换树脂上的交换顺序通常为：柠檬酸根＞PO43?＞SO42?＞I? ＞NO3-＞ SCN?＞NO2- ＞Cl? ＞ HCO3- ＞CH3COO?＞OH?＞F? (2)离子交换剂的交联度和交换容量:在一定的范围内树脂的交联度越大，交换容量越大，则组分的保留时间越长。 (3)流动相的组成：交换能力强的离子组成的流动相有较强的洗脱能力。流动相的离子强度高，使组分的保留值降低。 流动相的pH：溶质的离解受到抑制则保留时间变短。弱离子交换树脂的交换能力受PH影响较大，在某一pH值有极大值。 四、分子排阻色谱 分离原理　根据被分离组分分子的线团尺寸进行分离。 也称为分子排阻色谱法。 固定相：多为凝胶（具有立体网状结构的多聚体），故又称为凝胶色谱法。 流动相： 有机溶剂：凝胶渗透色谱 水：凝胶过滤色谱 分离取决于凝胶孔径和组分线团尺寸，大分子通过，小分子被截留，按分子大小洗脱 根据空间排阻（steric exclusion）理论，孔内外同等大小的溶质分子处于扩散平衡状态： 渗透系数： 　排斥极限：Kp=0；分子尺寸大于所有的孔径，不能进入孔穴中，[Xs]=0 全渗透点：Kp=1；分子尺寸小于全部的孔径，可以自由移动， [Xs]= [Xm] 分子尺寸在二者之间，0Kp1；分子尺寸越小，Kp越大，保留时间越长。 保留体积与渗透系数的关系　　　　　 Vm≈V0 分子线团尺寸（分子量）大的组分，其渗透系数Kp小，保留体积也小，因而先被洗脱出柱。 Vs：凝胶孔穴总体积 Vm：凝胶颗粒间体积 V0：死体积 VR：保留体积 固定相　多孔凝胶：软质、半软质和硬质 主要性能参数： 平均孔径 排斥极限（Kp=0）：不能渗透进入凝胶的任何孔隙最低分子量 分子量范围：排斥极限（Kp=0）与全渗透点（Kp=1）之间的分子量范围围。选择凝胶时应使试样的分子量落入此范围。 （1）软性凝胶 如葡聚糖凝胶、琼脂糖凝胶都具有较小的交联结构，其微孔能吸入大量的溶剂，并能溶涨到它干体的许多倍。它们适用于水溶性作流动相，一般用于小分子质量物质的分析，不适宜在高效液相色谱中。 凝胶种类