根瘤菌内源质粒的属间转移及其多样性研究.pdf

墙尊 的质粒标记菌株。利用sacB基因对蔗糖的敏感性进行标记质粒的消除，获得2020 的第二大质粒7653Ra很难被消除，原因可能是这两个质粒上含有菌株生长所必需的 基因。对2020及其质粒缺失突变株共生固氮能力的研究结果表明：2020第一大质 的消除则使突变株2020D8失去结瘤能力。 小与pJB5JI一样，其它几个转移接合子中的外源质粒小于pJa5JI。将出发菌株和所 得到的转移接合子进行共生效率和竞争结瘤实验的测定，结果表明：2020．137和 说明豌豆根瘤菌的共生质粒与供试根瘤菌的共生质粒的功能不能互补。转移接合子 子却不能结瘤，表明华癸中生根瘤菌的共生质粒可能抑制pJB5JI功能的表达，后者 可以在没有共生质粒的华癸中生根瘤菌的染色体背景下表达其结瘤功能，但固氮能 力的表达可能还需要豌豆根瘤菌中其它基因的协同作用。对pJBSJI在受体中的稳定 性进行检测，结果表明：pJB5JI可以在受体菌中稳定传代，但经过与紫云英共生之 后却只能在部分根瘤分离物中检测到pJB5JI。对供试转移接合子和出发菌株及分离 株进行I(IIl基因的PCR扩增，发现除出发受体菌外，其余菌株都可以得到PCR产物， 由此推断，在没有检测到pJaSJI的分离株中，pJBSJI可能部分或全部整合到了受体 根瘤菌的染色体DNA中。 费氏中华根瘤菌HN01含有三个内源质粒，其中第二大质粒是HN01的共生质粒， 是同时缺失了第二和第三大质粒的突变株。同时将pjaSjI转入ltN01和三个质粒缺 时带动了另一个内源质粒的转移。同时将出发菌株和所得到的转移接合子进行共生 效率和竞争结瘤实验的测定，结果表明：HN01．92和HND28．30的共生固氮能力和 中的情况不同，说明根瘤菌的共生固氮效率和竞争结瘤能力与外源质粒和菌株本身 的染色体基因都有关系；所有的转移接合子都不能在豌豆上结瘤，表明豌豆根瘤菌 的共生质粒不能在费氏中华根瘤菌的遗传背景下表达。对pJB5Jl在受体中的稳定性 进行检测，结果表明：pJB5Jl可以在受体菌中稳定传代，并且在经过与大豆共生之 后，从接合子所结的根瘤中均检测到外源质粒，说明外源质粒在费氏中华根瘤菌中 无论是人工传代还是与植物共生，都能稳定存在。 rRNAPCR．RFLP、16S rRNAIGS 利用16S rRNA基因全序列分析以及16S．23S PCR．RFLP技术对分离自我国江苏盐城，浙江温州，湖北仙桃及重庆等亚热带地区 rRNA 的42株豌豆根瘤菌进行了遗传多样性的研究。16S PCR．RFLP分析以及16S rRNA基因序列分析结果表明：所有供试豌豆根瘤菌可分为两个类群，类群l包括 USDA2370，为优势种群，占供试 XtPI在内的40株豌豆根瘤菌和足leguminosarum rRNA 菌株的97％。类群2由WzP3和WzPl5组成，与R．etliCFN42相近。16S．23S IGSPCR．RFLP研究结果表明：所有供试菌株分为18个基因型，在9l％的相似性上 USDA2370聚在一起。群II包括菌株 分为四个类群。其中群I与R．1eguminosarum 其中类群Ⅳ仅包括菌株YcP2，群V和Ⅸ分别来自温州和仙桃。该结果表明，供试菌 株的分类具有明显的地域特征。 关键词：华癸中生根瘤菌；费氏中华根瘤菌；质粒消除；共生效率；竞争结瘤；外 源质粒稳定性；多样性 Il Abstract huakuii2020contains Inthis three work，Mesorhizobium indigenousplasmids named