第5章 微生物遗传育种.pptVIP

PCR 扩增方式 一个循环需2～4分钟 PCR 扩增方式 一个循环需2～4分钟 PCR仪 PCR 技术的应用 PCR 技术具有十分广泛的实际用途： ① 可用于 DNA 的扩增和克隆，制备单链或双链 DNA 探针；也可用于定位诱变和 DNA 测序。 ② 在临床医学上可用于检测病原体，诊断遗传病，以及对癌基因的分析确定。 ③ 用于微生物分离菌株的系统发育分析，以确定分类地位。当用多对引物进行 PCR 时，可得到对个体特定的条带图谱，称为指纹图谱（ DNA fingerprinting ）。 DNA 指纹图谱能确定个体间的血缘关系。 由于 PCR 技术操作简单、实用性强、灵敏度高，并可自动化，因而在分子生物学、基因工程研究，微生物分子系统学以及临床医学、法医和检疫等领域得到日益广泛的应用。 PCR 技术的应用 PCR 技术具有十分广泛的实际用途： ① 可用于 DNA 的扩增和克隆，制备单链或双链 DNA 探针；也可用于定位诱变和 DNA 测序。 ② 在临床医学上可用于检测病原体，诊断遗传病，以及对癌基因的分析确定。 ③ 用于微生物分离菌株的系统发育分析，以确定分类地位。当用多对引物进行 PCR 时，可得到对个体特定的条带图谱，称为指纹图谱（ DNA fingerprinting ）。 DNA 指纹图谱能确定个体间的血缘关系。 PCR 技术的应用 PCR 技优点：操作简单、实用性强、 灵敏度高，并可自动化。 应用领域： 分子生物学 基因工程研究 微生物分子系统学 临床医学 法医 检疫 。 PCR技术可灵敏检测微生物 微生物菌种的衰退、复壮和保存方法 一、微生物菌种的衰退 定义： 衰退的防止： （1）控制传代次数 （2）创造良好的培养条件 （3）利用不同类型的细胞进行接种传代 （4）采用有效的菌种保藏方法 二、复壮 1. 纯种分离：平板划线分离培养、稀释倾注平板分离培养、选择培养基和鉴别培养基分离培养和单细胞分离培养。 2. 通过寄主体进行复壮 3. 淘汰已衰退的个体 三、菌种的保藏 菌种保存方法原则：不死亡、不变异、没有杂菌污染 。 挑选典型菌种的优良纯种，最好是休眠体，例如 分生孢子、芽孢等； 创造一个最有利休眠或降低代谢的环境条件，例如 干燥、低温、缺氧、避光。 三、菌种的保藏 1、低温保存（冰箱保藏）法 温度下降，微生物代谢活动降低；用于微生物短期保藏（除嗜冷微生物外）。 在琼脂斜面上——（细菌、霉菌、酵母）保藏期3~6月； 在半固体中——2~5℃（细菌、酵母）保藏期6~12月； 三、菌种的保藏 2、冰冻真空干燥保存 菌种→保护剂→滴数滴无菌菌种玻管→-40℃冰箱中冻结→低温高真空干燥→封口→室温或低温保存数年。 三、菌种的保藏 3、超低温冰箱保存。 －80℃超低温冰箱，可以长期保存菌种 4、液氮超低温保存。 液氮的温度可达-196℃。 最佳的活细胞保藏方法。 最佳的菌种保藏方法。 微生物菌种保藏机构名称和缩写 国内 缩写 名称 缩写 名称 ACCC 中国农业微生物菌种保藏管理中心 ISF 中国农业科学院土壤肥料研究所 SH 上海市农业科学院食用菌研究所 CACC 抗菌素菌种保藏管理中心 IA 中国医学科学院抗菌素研究所 SIA 四川抗菌素工业研究所 CCGMC 普通微生物菌种保藏管理中心 AS 中国科学院微生物研究所 AS-IV 中国科学院武汉病毒研究所 CFCC 林业微生物菌种保藏管理中心 CAF 中国林业科学院菌种保藏管理中心 CICC 工业微生物菌种保藏管理中心 IFFI 轻工