《吉富罗非鱼肝脏蛋白质组双向电泳技术的建立与优化-论文》.pdfVIP

西 南 农 业 学 报 2013年 26卷5期 2122 SouthwestChinaJournalofAgricuhnralSciences Vo1．26 Nn5 文章编号 ：1001—4829(2013)05—2122—05 吉富罗非鱼肝脏蛋 白质组双向电泳技术的建立与优化 朱佳杰。，沈夏霜 ，付 强 ，周 宇 ，谭 芸 ，甘 西¨ (1．广西壮族 自治区水产研究所，广西水产遗传育种与健康养殖重点实验室，广西南宁 530021；2．广西大学，广西南宁 530004) 摘 要：以吉富罗非鱼为研究对象，通过对其肝脏蛋白质的提取方法、等电聚焦程序和IPG胶条PH选择这几个关键环节的优化探 索，建立了吉富罗非鱼肝脏蛋白质组双向电泳技术体系。结果表明：①采用液氮研磨法比匀浆器匀浆法提取蛋白质的效果更好； ②聚焦时延长除盐时间至10h，同时升高电压至8000V，可获得清晰的电泳图谱；③通过双向电泳检测到吉富罗非鱼肝脏的蛋 白 点主要分布于pH值4．0～7．0之间。该技术体系的建立为今后开展罗非鱼蛋白质组学的进一步研究奠定了基础。 关键词：吉富罗非鱼；肝脏；蛋白质组学；双向电泳 中图分类号：$965．125 文献标识码：A EstablishmentandOptimizationAnalysisofTwo-dimensional ElectrophoresisSystem onGIFT TilapiaLiver ZHUJia-jie，‘SHENXia．shuang，FUQiang2，ZHOUYu ，TANYun。，GANXi‘‘ (I．GuangxiInstituteofFisheries，GuangxiKeyLabofAquaticGeneticBreedingandHealeyAuqaculutre，GuangxiNanning530021，Chi- na；2．GuangxiUniversity，GuangxiNnaning530004，China) Abstract：Inthepresentstudy，geneticimprovementoffarmedtilapia(GIFt)wasusde assutdymaterialintheexperiment．Thetwo。di- mcnsionalclcetrophoresis(2-DE)forGIFTliverwasestablishde andoptimizedthroughcomparativetestsbyusingdifferentextractionmeth· ods，isoelectricfocusingprogramsandimmobilizedpHgradients(IPG)strips．Theresultsshowedthat(i)theeffcetofextractionprotein liuqidnitrogen ndingwasbetterthanthehomogenatemachine；(ii)thedesalfingtimeaddeduptolOhandthevoltageroesto8000V， whichcouldgetmorecleantwo—dimensionalelectrephoresismap；(iii)TheproteinsofGIFTliverwereobtainde inpH4．0—7．0by2-DE detection．OS awtodimensionalelectrophoresisworkflowofrG1Frtilapiaproteinsseparationhadbeenestablishment．whichcouldlaidaofun- dationofrthefurtherstudyondifferentialproteomicsoftilapia． Keywords：GIFT ；Liver；Proteome；Two—dimensionalelectrophoresis(2-DE) 吉富罗非鱼(GI丌 strainOreochramniloticus)是 也是 目前生物学研究的热点。蛋 白质组学 (pro— 通过尼