中华鳖细菌疫苗免疫佐剂的筛选及其初步应用.pdf

第 25卷第 1期 大 连 水 产 学 院 学 报 Vo1．25No．1 2010年 2月 JOURNALOFDAUANnSHERIESUNIVERSITY Feb．20l0 文章编号：1000—9957(2010l0l一0019—05 中华鳖细菌疫苗免疫佐剂的筛选及其初步应用 郝贵杰，潘晓艺，姚嘉赞，徐洋，尹文林，沈锦玉 (浙江省淡水水产研究所，浙江 湖州313001) 摘要：将分离自中华鳖Trionyxsinensis主要细菌性疾病——肠道出血性败血症、鳖穿孔病 (疖疮病)、红脖 子红底板病、鳖腐皮病的4株病原菌，在体积分数为3．5％的福尔马林溶液中灭活24h。在灭活的4株菌 中添加不同佐剂，充分混匀后分别制备成总含菌量为6X10’-~／mL的4价菌苗，分别免疫8只ICR小 鼠， 并设不加佐剂免疫组及空白组作为对照。经3次免疫后，随机选3只小鼠抽血制备血清，用间接ELISA方 法测定抗体效价，除空白对照组外，其它4组小鼠的免疫血清效价为 1：1．6×10一1：2．56×10，各免疫 组的效价依次为弗氏佐剂白油佐剂蜂胶佐剂不加佐剂。另外5只小 鼠用于免疫保护性试验。结果表 明：3种佐剂的免疫保护率均为 100％，而不加佐剂组免疫保护率为80％，空白对照组死亡率为 100％。考 虑到弗氏佐剂的成本较高且白油佐剂有副作用，故选择蜂胶作为免疫佐剂 ，制备了中华鳖4价菌苗。用该 菌苗免疫接种50只体重为 100～150g,／只的健康中华鳖，注射剂量为0．2mL／只，并设置对照组 (注射等 量的生理盐水)，共接种20只健康中华鳖。分别于免疫后第2O、3O、4JD、50天随机采集3只受免疫的中华 鳖和对照组的1只中华鳖血液并制备血清，用浙江省淡水水产研究所制备的针对中华鳖 IgM的单抗31-13介 导的ELISA方法，测定血清中的抗体效价。结果表明：当中华鳖免疫后40d，血清中抗体效价达到最高， 为 1：6．4×10；免疫后50d将受免中华鳖分成4组，分别用4种菌株以5LD5o(9×10b／mL)进行攻毒 试验 (0．5mL／只)，结果免疫保护率均达到100％，而对照组死亡率均为 100％。 关键词：中华鳖；细菌疫苗；佐剂；免疫预防；单克隆抗体 中图分类号：$947．1 文献标志码 ：A 近年来，在中华鳖Trionyxsinensis的养殖生产 挑选4株对鳖危害性较大的温和气单胞菌制备菌 中，鳖的疾病越来越多，因而造成巨大的经济损 苗，并选择3种不同佐剂进行免疫，筛选合适的免 失…。目前，引起中华鳖的主要细菌性疾病有肠 疫佐剂，旨在为进一步开发研制鳖用疫苗，有效地 道出血性败血症、鳖穿孔病 (疖疮病)、红脖子红 防治鳖的病害提供参考依据。 底板病、鳖腐皮病等。沈锦玉等 已从这些患病 1 材料与方法 鳖上分离到温和气单胞菌Aeromonassobria。采用药 物防治这些病其效果不甚理想，还易造成抗药性菌 1．1 菌株来源 株的出现，而且污染环境，导致鳖肉质量下降等， 而采用免疫预防可避免这些弊端。国外商品性鱼用 4株温和气单胞菌TK961010 (分离 自患典型 疫苗在 20世纪7O年代已开始生产，国内对鱼用疫 肠出血性败血症病甲鱼)、TL970424 (分离 自患穿 苗也有研究 】，但对于鳖病免疫的研究不多。贾 孔病甲鱼)、TK970409 (分离 自患红脖子红底板病 亚东等 6【比较了嗜水气单胞菌等3种致病菌的粗脂 甲鱼)、TL970528 (分离 自患腐皮病甲鱼)由浙江 多糖 (LPS)对中华鳖的免疫原性，结果表明