第六章 植物细胞制药精品.pptVIP

（4）抗生素和植物杀菌素 抗生素（antibiotic）是由微生物（如某些菌类植物）产生的能杀死或抑制某些微生物生长的物质，如青霉素、链霉素等。高等植物如葱、蒜、辣椒、萝卜等也能产生杀菌的物质，称为植物杀菌素（plant fungicidin）。 四、植物培养细胞的生理特性 植物培养细胞不同生长阶段的持续时间及特征。 延迟期（lag phase） 细胞分裂的初始期和最大生长期之间，其持续时间取决于培养前的条件、时期和培养基性质，其特征是细胞数量、干重近乎恒定，细胞壁厚度达最大；高RNA含量；高蛋白质合成能力；高聚核糖体含量；有丝分裂加速；增加细胞的细胞质部分。 加速期（acceleration phase） 细胞最大生长期和最大细胞浓度，最佳DNA浓度和蛋白质累积率，持续时间3~4代，其特征为常数：干重；增加：细胞数、DNA和蛋白质浓度；减少：有丝分裂活性、RNA含量和蛋白质合成能力；增加细胞鲜种、干重及RNA酶活性。 对数期（log phase） 介于最大生长率和蛋白质合成完全停止期之间 ，其特征为蛋白质合成能力减退；变化：聚核糖体浓度向有利于单核糖体和寡核糖体形成的方向减少。 稳定期（stationary phase） 细胞数稳定， 其特征为细胞高液泡化、极度脆弱、高度分化，有机化合物的浓度高。 由上所述可以知道，植物培养细胞重量的增加主要取决于对数期，而次级代谢产物的累积则主要在稳定期完成。当然植物细胞与哺乳动物细胞及微生物细胞有很多的不容，并由此导致了一系列生理生化等方面的差异，比如混合与传质等。就植物细胞而言，它们很少以单一细胞悬浮生长，而多以非均相集合体的细胞团形式存在。根据细胞系的来源、培养基及培养时间等的不同，细胞团的细胞数目在2~200 之间，直径为2mm左右。 细胞团产生的原因有两个：（1）细胞分裂之后没有进行细胞分离；（2）在间歇培养过程中细胞处于对数生长后期时，开始分泌粘多糖和蛋白质，或者以其它形式形成粘性表面，从而形成细胞团。 植物细胞形态上的另一特性，就是其纤维素细胞壁使得其外骨架相当脆弱，表现为抗张力强度大，抗剪切能力小，故传统的搅拌式生物反应器容易损坏植物细胞的细胞壁。再者，植物细胞培养基黏度度比较高，且培养时间的延长，细胞数量呈指数上升。 所有的植物都是好气性的，因此培养过程中需要不断地供氧。但是，与微生物细胞相反，它并不需要很高的气液传质速率，而是要控制供氧量，以保持较低的溶氧水平。此外，大多数植物细胞液体培养的pH为5~7，在此pH水平，通气速率过高会驱除二氧化碳而抑制细胞生长，这个问题可通过在通气过程中加入一定浓度的二氧化碳来解决。注意光照的影响。 植物细胞液体培养过程中的泡沫问题不象微生物细胞培养时那么严重，泡沫的性质也不同。气泡比微生物培养系统中的大，而且由于其含有蛋白质或粘多糖，黏度较大，细胞极易被包埋在泡沫中，并从循环的营养液中带出来，这就造成了非均相培养，通常需要采用化学或机械的方法加以控制，否则，随着泡沫和细胞数量的增加，混合和培养过程的稳定性就要受到影响。 在植物细胞液体培养过程中，细胞可能会黏附于培养的反应器壁、电极或挡板的表面上。细胞对表面的黏附及其在器壁上的生长特性，是人们目前正在研究的重点课题之一。通过改变培养基中某些离子的成分，可使表面吸附问题得到一定程度的改善。 第三节 植物细胞培养的基本技术 一、植物材料的准备 用于植物组织培养的外植体，必须是无杂菌材料。微生物在接触培养基时会大量繁殖，抑制培养物的生长，因此需灭菌处理。 许多化学试剂均能作为表面灭菌剂使用，原则上应尽可能选择那些灭菌后易于除去或容易分解的时间试剂。 灭菌剂的选择和处理时间的长短取决于所用材料对试剂的敏感性。对灭菌剂敏感的外植体的灭菌时间不宜过长；而不敏感的，灭菌时间则可适当延长。经常使用的灭菌剂如下表。 很好 很好 好 很好 好 最好 较好 5~30 5~30 5~15 2~10 5~30 2~10 30~60 易 易 最易 易 较难 较难 中 9 ~10 0.5 ~5 3~12 1~2 1 0.1~1 4~50mg/L 次氯酸 钙 次氯酸钠 过氧化氢 溴 水 硝 酸 银 氯 化 汞 抗 生 素 效果 灭菌时间/min 去除难易程度 使用浓度/% 灭菌剂 选取嫩叶、叶片平放在琼脂上 无菌水反复冲洗，滤纸吸干 1g/L氯化汞浸1min 自来水，吸干，纯酒精 叶片 无菌水洗3次，滤纸吸干 20g/L次氯酸钠浸20~30min 自来水 储藏器官 无菌水洗3次 20g/L次氯酸钠浸5~30min 自来水洗净，再用酒精洗 茎切段 获得无菌苗 无菌水冲洗，再剖除内部组织的种子 20g/L次氯酸钠浸10min 纯酒精漂洗 果实 用幼根或幼芽发生愈伤组织 无菌水洗3次，在无菌水