第六章基因的表达与调控(上)精品.pptVIP

基因的表达与调控 原核基因表达调控 真核基因表达调控 原核基因表达调控 组成变化 组成型合成蛋白质 (constitutive) 合成速率不受环境变化或代谢状态的影响：如DNA聚合酶、RNA聚合酶等都是代谢过程中十分必需的酶或蛋白质，其 适应型或调节型合成蛋白质 (adaptive or regulated) 合成速率明显地受环境的影响而改变 真核与原核生物转录及翻译调控的总体特征比较 细菌中转录调控体系 大肠杆菌中的σ因子4个结构域 σ因子都含有4个保守区 特殊代谢物调节 可诱导调节 一些基因在特殊的代谢物或化合物的作用下，由原来关闭的状态转变为工作状态，即在某些物质的诱导下使基因活化。 可阻遏调节 基因平时都是开启的，处在产生蛋白质或酶的工作过程中，由于一些特殊代谢物或化合物的积累而将其关闭，阻遏了基因的表达。 弱化子对基因活性的影响 属于这种调节方式的有大肠杆菌中的色氨酸操纵子、苯丙氨酸操纵子、苏氨酸操纵子、异亮氨酸操纵子和缬氨酸操纵子以及沙门氏菌的组氨酸操纵子和亮氨酸操纵子、嘧啶合成操纵子等等。 在这种调节方式中，起信号作用的是有特殊负载的氨酰—tRNA的浓度，在色氨酸操纵子中就是色氨酰—tRNA的浓度。当操纵子被阻遏，RNA合成被终止时，起终止转录信号作用的那一段核苷酸被称为弱化子。 降解物对基因活性的调节 细菌的应急反应 乳糖操纵子与负控诱导系统 乳糖操纵子与负控诱导系统 法国巴斯德研究所著名科学家Jacob和Monod在1961年首先提出 lac操纵子 大肠杆菌乳糖操纵子 3个结构基因：Z、Y和A，以及启动子、控制子和阻遏子 Z编码β—半乳糖苷酶； Y编码β—半乳糖苷透过酶； A编码β—半乳糖苷乙酰基转移酶 酶的诱导—lac体系受调控的证据 乳糖确实能激发lac mRNA的合成 安慰性诱导物 同位素示踪实验 lac体系的“开—关”特性 安慰性诱导物 实验室里常常使用两种含硫的乳糖类似物— 异丙基巯基半乳糖苷(IPTG) 巯甲基半乳糖苷(TMG) 在酶活性分析中常用，发色底物O—硝基半乳糖苷(ONPG) 操纵子模型及其影响因子 操纵子模型 Jacob和Monod (1)Z、Y、A基因的产物由同一条多顺反于的mRNA分子所编码 (2)该mRNA分子的启动区(P)位于阻遏基因(I)与操纵区(O)之间，不能单独起始β—半乳糖苷酶和透过酶基因的高效表达 (3)操纵区是DNA上的一小段序列(仅为26bp)，是阻遏物的结合位点 (4)当阻遏物与操纵区相结合时，lac mRNA的转录起始受到抑制； (5)诱导物通过与阻遏物结合，改变它的三维构象，使之不能与操纵区相结合，从而激发lac mRNA的合成。 有诱导物存在时，操纵区没有被阻祖遏物占据， 所以启动子能够顺利起始mRNA的转录 1．lac操纵子的本底水平表达 2．大肠杆菌对乳糖的反应 3．阻遏物lac I基因产物及功能 4．葡萄糖对lac操纵于的影响 5．cAMP与代谢物激活蛋白 lac操纵子的本底水平表达 在非诱导状态下有少量的lac mRNA合成(大约每个世代中有1-5个mRNA分子)，这种合成被称之为本底水平的组成型合成(baekgound level constitutive synthesis)。 由于阻遏物的结合并不是绝对紧密的，即使在它与操纵基因紧密结合时，也会偶尔掉下来；这时启动子的障碍被解除，RNA聚合酶开始转录 阻遏物lac I基因产物及功能 现已查明，如操纵子阻遏物mRNA是由弱启动子控制下组成型合成的，该阻遏蛋白有4个相同的亚基，每个亚基均含有347个氨基酸残基，并能与1分子IPTG结合。 未经分级分离的细胞提取物的结合能力大约为每细胞结合20-40个IPTG分子，因此推测每个细胞中有5-10个阻遏物分子。观察发现在I-突变株细胞提取物中缺少阻遏物，从而证明与IPTG结合的物质确实是蛋白质。 当I基因由弱启动子突变成强启动子，细胞内就不可能产生足够的诱导物来克服阻遏状态，整个lac操纵子在这些突变体中就不可诱导。 葡萄糖对lac操纵于的影响 β—半乳糖苷酶在乳糖代谢中的作用是把前者分解成葡萄糖及半乳糖(半乳糖将在gal操纵子的作用下再转化成葡萄糖)。 如果将葡萄糖和乳糖同时加入培养基中，大肠杆菌在耗尽外源葡萄糖之前不会诱发lac操纵子。 葡萄糖对lac操纵子表达的抑制是间接的。 有一个大肠杆菌突变体，它在糖酵解途径中不能将葡萄糖—6—磷酸转化为下一步代谢中间物，这些细菌的lac基因能在葡萄糖存在时被诱导合成。所以，我们说不是葡萄糖而是它的某些降解产物抑制lac mRNA的合成，科学上把葡萄糖的这种效应称之为代谢物阻遏效应(catabolite repression)。 cAMP与代谢物激活蛋