枸橼酸钾对三聚氰胺氰尿酸盐肾结石大鼠的干预的分析.pdf

／煳 枸橼酸钾对三聚氰胺氰尿酸盐肾结石大鼠 模型的干预研究 硕士研究生：廖桂祥 指导教师：于永刚 摘要 研究背景 2007年3月美国大量动物因食用含有三聚氰胺与三聚氰酸的宠物饲料发 生急性肾衰竭而死亡。这些中毒宠物均出现尿毒症症状，并伴有血尿、食欲减 退、呕吐、昏睡等多种症状。在死亡宠物的在肾脏组织内远曲小管或者集合管 内发现出现的特异性结晶。这些结晶经红外光谱证实为三聚氰胺一三聚氰酸混合 物。Puschner等对猫进行了三聚氰胺及其同系物的毒性研究发现单独喂含有三 聚氰胺的饲料持续10天，在猫的肾功能上没有观察到明显的变化，在肾脏内也 没有见到肾内晶体形成。而以三聚氰胺和三聚氰酸的饲料喂猫，猫出现急性肾 功能衰竭，在猫的尿液和肾组织切片中可以观察到暗黄色的晶体形成。 鱼的组织内发现三聚氰胺及三聚氰酸二者的残余。梁毅文等的研究也证实了单 胃大鼠没有发现对肾脏功能有影响，而利用三聚氰胺与三聚氰酸联合灌胃SD大 鼠，不管是三聚氰胺和三聚氰酸各30mg／kg还是各400mg／kg均可以在大鼠尿液 或者肾脏内观察到特异性的结晶形成，并经红外光谱证实该结晶为三聚氰胺氰 尿酸盐，该晶体可对肾脏造成损害，在400mg／kg大剂量时一周内观察到大鼠因 急性肾衰竭死亡。Takahiro Kobayashi等的研究也证实了联合灌胃三聚氰胺与 三聚氰酸 12—120mg／kg 可致大鼠肾结石，在肾脏内同样可以观察到结晶的形 中文摘要 成。 据中国卫生部的报道，截止到2008年11月，294000名婴幼儿因食用含有 三聚氰胺的问题奶粉而发生泌尿系统疾病，其中50000多名儿童住院，更为严 重的是其中6名儿童因急性肾衰竭而死亡。在这些受影响的婴幼儿中，很多发 生泌尿系结石。对于三聚氰胺问题奶粉儿童的结石成分分析显示，梁军对5例 问题奶粉术后结石成分分析为二水尿酸和尿酸胺。南京大学孙西钊对南京地区 问题奶粉患儿结石成分分析也得到相同的成分。北京儿童医院对问题奶粉患儿 F等报道了一例儿童由于食 结石成分分析表明了含有三聚氰胺和尿酸。Grases 用含有三聚氰胺的奶粉引起膀胱结石，通过结石成分显示为三聚氰胺和尿酸的 混合物。三聚氰胺可以在尿液中形成结晶当它的浓度超过最低限量。三聚氰胺 因为其含氮量较高 66．67％ 而被不法商人掺入到食品中来虚假提高其蛋白含 量。在中国的一些问题奶粉中，也可以检查到含有三聚氰胺及三聚氰酸。而且， 在其他食品中，比如饼干、液态奶、奶糖、巧克力等制品中也发现含有不同浓 度的三聚氰胺及三聚氰酸。三聚氰胺是工业上广泛应用的工业产品，主要用来 制造三聚氰胺甲醛树脂，也可以用来生产涂料、塑料、粘合剂、厨房台面、餐 具等。三聚氰酸也广泛用来自来水、游泳池的消毒。 中国卫生部专门针对婴幼儿三聚氰胺泌尿系结石的治疗而发表了《与食用 受污染三鹿牌婴幼儿配方奶粉相关的婴幼儿泌尿系统结石诊疗方案》。其中碱化 尿液是治疗的方法之一。枸橼酸钾是常用的尿液碱化剂，是治疗和预防泌尿系 结石的常用药物，可以抑制盐结石 草酸钙、磷酸钙和尿酸 的形成和复发。 许多研究表明枸橼酸钾在治疗和预防含钙结石、尿酸结石有一定疗效。本研究 旨在建立三聚氰胺氰尿酸盐肾结石模型，研究枸橼酸钾对三聚氰胺氰尿酸盐肾 结石的干预作用，为进～步寻求防治方法及临床上治疗问题奶粉所致泌尿系结 石提供实验依据。 研究目的： 1．研究联合灌胃三聚氰胺与三聚氰酸制造三聚氰胺氰尿酸盐大鼠肾结石 的模型的机制，提供一种新的复制大鼠肾结石模型的方法。 Ⅱ 硕士学位论文 2．研究枸橼酸钾对三聚氰胺氰尿酸盐肾结石大鼠的干预机制。 研究方法： 1．造模和分组 将36只SD雄性大鼠随机分成A组 空白对照组 、B组 三聚氰胺 以上各药均配置成2ml液体每只每次灌胃。 2．指标的收集和检测 动物饲养2周，每天观察动物的一般情况，如饮食、活动、尿液情况、精 神状态等。用代谢笼收集第1天、第14天24h尿液。取第1天尿液，涂片观察 尿液沉渣情况。取第14天尿液，测24h排尿量和尿pH值。14天后大鼠处死前 称体重，从下腔静脉采血检测血液肌酐、血尿素氮和血尿酸。取双肾，称双肾 重量，计算肾体比，肾体比 双肾重／体重×100％。用外科显微镜观察肾脏大体 变化情况。取左肾进行HE病理切片，并对肾脏病理切片观察病理变化及三聚氰 胺氰尿酸盐结晶情况，并按文献标准进行分级。结晶的分级程度用半定量评估 为：0级：无任何结晶亮点；I级：很少的结晶亮点；II级：一些结晶亮点； Ⅲ级：许多结晶亮点，广泛连接成片。 3．统计学处理 采用SPSS13．O统计软件进行统计学处理，数据以x_--／-s表示。肾内结 U检验。尿液、血生化采 晶评分采用非参