乳源抗高血压生活性肽在大肠杆菌中表达的研究.pdfVIP

摘要 摘 要 课题背景： ／高血压是一种慢性的心脑血管疾病，是冠心病，脑卒中等心脑血管疾病的主要危险 Bj秦据统计，全世界每年因高血压引起的心脑血管疾病的死亡人数超过1200万，高血 压病已成为人类健康的第一杀手，成为全球性的重大的公共卫生问题。目前，世界卫生 组织(WHO)批准用于治疗高血压病的一线药物主要有利尿剂、13受体阻断剂、血管紧 张素转换酶抑制剂(ACEI)、钙通道阻滞剂(CaA)、a受体阻断剂、血管紧张素(Ang) 受体拮抗剂等六大类。Y 研究表明，肾素．血管紧张素系统(RAS)在机体的血压调节过程中起着十分重要的 作用。在该系统中，ACE酶是血压调节过程中一个关键的酶，它可以将无活性的血管紧 II)，从而导致血管收 张素I(AngI)水解生成具有血管收缩作用的血管紧张素II(Ang II的转化， 缩，机体的血压升高。ACEI可抑制ACE酶的活性，从而抑制了AngI向Ang 使机体血压维持恒定。因此，ACEI在治疗高血压病中的应用也越来越广泛。但是使用 药物治疗都有一定的副作用，所以，寻找安全的、天然的、食物来源的ACEI物质来治 疗高血压引起了广大科学家们极大的关注。 有研究报道，在牛乳酪蛋白的胰蛋白酶水解物中分离到了一些在体外具有ACE酶抑 制活性、经动物实验(体内实验)证明具有降低血压作用的抗高血压生物活性肽。这一 研究结果引起了科学家们的极大兴趣，极大地促进了乳源抗高血压小肽的研究。然而， 到目前为止，所有的乳源抗高血压小肽都是通过蛋白酶对乳蛋白质的水解获得的，还没 有通过基因工程技术来表达抗高血压小肽的研究报道。 研究目的： 本课题的研究目的是研究乳源抗高血压生物活性肽CEI。2在大肠杆菌中的表达情况， ，探讨采用基因工程技术大量生产乳源抗高血压生物活性肽CEIl2的可能性。 f方案设计： 、、 本研究根据文献已经公开发表的、在体内外实验中证明具有降血压作用和ACE酶抑 制活性的、来源于牛乳酪蛋白的一段被称为CEI。：的多肽氨基酸序列 3·)， JMl09、EColiBL21和 经酶切后与融合表达载体pQEl6连接，转化到大肠杆菌E．Coli E．ColiDH5 a中。从转化的平板中筛选出阳性重组子，进行不同IPTG浓度和不同诱导时 间的表达研究，并利用SDS．PAGE电泳和Western blotting蛋白质印迹技术对外源基因 DH5 CEIl2在大肠杆菌E．Coli．JMl09、E．Coli．BL21和E．Coli a中的表达情况进行检测 分析。最后对重组菌的生长条件、生长曲线、发酵条件和表达产物的体外生物学活性进 行了研究。 研究结果： JMl09和E 外源基因CEll2在大肠杆菌E．Coli Coli．BL21中获得了一定量的表达， Coli．DH5 而在大肠杆菌E a中没有表达。在大肠杆菌E．Coli．JMl09中的表达量约为500 u Coli g／L培养液，在大肠杆菌E BL21中的表达量约为1．2mg／L培养液。 经用不同的IPTG浓度对重组大肠杆菌EColi．JMl09和E．ColiBL21进行诱导表达 发现，不同的IPTG浓度诱导对外源基因CEll2的表达量影响不大，不同的诱导时间对外 源基因CEIl2的表达水平也无明显影响。经对重组大肠杆菌E．Coli．BL21进行长时间的 诱导表达发现，当诱导