乳链菌肽抗性蛋(nsr)突变体在大肠杆菌中的表达纯化及功能研究.pdfVIP

摘要 乳链菌肽(Nisin)是某些乳酸菌产生的一种阳离子抗菌肽，而Nisin抗性蛋 白(Nisinresistance 性。本实验室前期研究结果表明，作为乳酸乳球菌中第一个被鉴定的末端特异性 蛋白酶，NSR是通过降解Nisin使其抑菌活性降低来行使Nisin抗性功能的，其 之间。在此研究基础上，本文进一步对NSR蛋白的结构与功能关系，包括其核 心功能区降解Nisin活性及与底物Nisin的结合能力等进行了研究，为深入了解 和阐明NSR作为一种末端特异性蛋白酶行使Nisin抗性的作用机制奠定基础。 本研究首先是确定NSR行使体外降解Nisin功能的核心功能区域。在对NSR 蛋白进行同源序列分析以及二级结构、三级结构比对的基础上，构建了不同结构 达载体NSR-TSP、NSRA94、NSRA78、NSRA67、NSRA38，并转化大肠杆菌 Ecoli BL21。经异丙基…13D硫代半乳糖苷(Isopropyl IPTG)诱导后，SDS—PAGE分析显示各表达产物均以部分可溶形式存在。经过 不同结构域缺失突变体蛋白。进而通过体外反应系统，检测了各突变体体外降解 没有丧失抑菌活性；反相高效液相层析(RP．HPLC)分析结果进一步表明这是 △78、NSRA67则不具备Nisin降解活性。 为进一步分析NSR不同功能区识别结合底物Nisin的能力，采用相同策略， 蛋白酶切后获得电泳纯不具降解活性的突变体蛋白。利用表面等离子共振技术 数量级，表明了其更强的底物结合能力。 关键词： 乳链菌肽抗性蛋白，末端特异性蛋白酶，GST融合蛋白，表面等离子共振(SPR) Abstract Nisinis alantibioticantimicrobial somestrainsof peptideproducedby Lactococcuslactis．Itis active awide of bacteria highly against rangeGram-positive food andrelevantclinicalbacteria．insomenisin includingimportantpathogens L．1actis resistancecouldbeconferreda nisin strains，nisin byspecific non-producing resistance encodesa35kDanisinresistance gene(nsr)which protein(NSR)． thatas studiesinour showed thefirstidentified Preliminary laboratory in endowshoststrainswithresistancetonisin L．1actis，NSR tail-specificprotease thebactericidaltoless cleavenisin／n throughdegrading agent potentproducts，which vitroandthe sitewas between and cleavage pinpointed S09． Onthebasisofthis articlefurtheronrevealthe between s