亲和双水相萃取木瓜中木瓜蛋白酶的研究.pdfVIP

摘 要 双水相萃取技术是近年来发展起来的一种新型的生化分离技术，该技术具有生物 相容性高，分离条件温和，分离步骤简单，易于放大，且不存在有机溶剂残留等优点。 已广泛用于各类酶、核酸、生长激素等有效成分的提纯。 本文首先研究了构造双水相体系的成相组分及不同操作条件对木瓜蛋白酶活性 的影响。实验表明，不同分子量的聚乙二醇@EG)以及在双水相成相浓度范围内，其对 木瓜蛋白酶活性影响不大；木瓜蛋白酶活性适合的温度范围为200C~700C；最适合的 大，而加入l(Br明显使木瓜蛋白酶活性降低。 体系中的分配行为及影响木瓜蛋白酶分配的因素。 在两种双水相体系中分别研究了PEG分子量、PEG浓度、磷酸盐浓度、州4)2S04 浓度、pH等因素对木瓜蛋白酶在两相中的分配系数、酶活性回收率的影响。实验结 果表明，．在PEG／磷酸盐双水相体系中，以下的实验条件下可获得较高的酶活性回收 以下的实验条件下可获得较高的酶活性回收率：PEG平均分子量600，浓度35％， 可达到85％。 通过实验测定了不同分子量PEG和不同pH值的磷酸盐、硫酸铵形成的双水相体 系的相图，考察了pH值和外加盐NaCl、KBr对双水相形成区域的影响。在选定的实 验条件下，结果表明，随着PEG分子量、pH值增大，成相区域变小；而加入电解质 使成相区域发生偏移。 ． 本文首次研究了金属鳌合亲和配基PEG．IDA-C呷I)对木瓜蛋白酶亲和分配的影 统中，木瓜蛋白酶有相对较高的分配系数。系统pH对分配的影响很小。PEG分子量 取代比率的增加，酶分配系数有所增大，趋于在上相富集。综合考虑得率和纯化因子， 比率为10％系统，该系统中木瓜蛋白酶的分配系数为27，纯化因子为2．8，回收率达 到96％。 论文对双水相体系用于木瓜蛋白酶分离的优点及存在的问题进行了分析，并提出 了解决所存在问题的一些建议。本项目获得海南省自然科学基金(80677)和海南省教 。 育厅高等学校科学研究项目@1200656)资助。 关键词：双水相体系；聚乙二醇；木瓜蛋白酶；萃取；亲和配基 Ⅱ Abstract ex们棚onisa m Aqu∞璐t、)l，o—ph硒e rle、Ⅳbiosep删on m∞nt tIechIliq∞deVeloped yea娼．1k bios印啪土ion adv锄tages te澌q∞h勰maIlyguch淞mgherbioc0Inpatibilily，Iesss印ar撕∞ f∞idueof orgamc ∞lv咖siIl吐le so∞．nh嬲been product锄d widely邯ed t0刚鸟di侬，呦t即巧mes，加cIeic∞ids， ho咖0鹏锄dbioactiVe iIl growtll cOmpOnentpl跚ts． hl廿lis e妇f．ects experiment，tlleof∞veml向潮临伽p印aill f．a咖rsincluI丑ed恤e of compon锄tsaq∞o∞佃呻ha∞sy蹴m锄ddi彘崩吐0pe删cing∞nditio璐．ne sho、ⅣedtllatⅡl