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吉林农业大学硕士论文 盐酸克伦特罗单克隆抗体的制备及特性鉴定 盐酸克伦特罗单克隆抗体的制备及特性鉴定 摘 要 2-肾 盐酸克伦特罗(Clenbuterol，CL)，俗名“瘦肉精”，是一种人工合成的B 上腺素能兴奋剂，具有调节动物神经兴奋及其体内营养素重分配的功能。在肉畜饲料 中添加盐酸克伦特罗，可以减缓或减少脂肪沉积，增加肌肉蛋白沉积，使营养重新分 配，从而改善肉畜胴体品质。但由于盐酸克伦特罗难以代谢排出，会大量蓄积在动物 机体内，维持较高的残留量，给人和动物带来严重的危害。虽然国家的政策法规已经 严令禁止使用盐酸克伦特罗作为饲料添加剂，但仍有违规应用。因此，为保证肉品质 量和人类的健康，建立准确、快速、简便的检测盐酸克伦特罗残留的方法具有重要的 意义。 目前，我国使用的盐酸克伦特罗ELISA检测试剂盒主要依赖于进口，价格昂贵， 不利于推广使用，因此，开发具有自主产权的ELISA检测试剂盒已成为当务之急。 要研制盐酸克伦特罗ELISA检测试剂盒，首先要制备出特异性强、敏感性高的抗盐 酸克伦特罗的单克隆抗体。因此，本研究旨在研制抗盐酸克伦特罗的单克隆抗体并 进行免疫学特性鉴定。 本研究以重氮化法将盐酸克伦特罗偶联于载体牛血清白蛋白(BSA)，形成的结 合抗原BSA-CL作为免疫原，与等体积的弗氏完全佐剂充分混匀后腹部及皮下多点免 疫6～8周龄BALB／C小鼠，每只小鼠96¨g／只。然后每隔14天后再与弗氏不完全佐 剂混合免疫小鼠，共免疫2次，末次加强免疫以96Pg／只尾腹腔注射。同时将cL与 卵清白蛋白(OVA)偶联制备检测原(OVA—CL)。四次免疫后选择免疫效价高的小鼠 脾细胞与SP2／O骨髓唐细胞进行细胞融合。结果发现，365孔有融合细胞生长，融 合率约为54％。 以间接ELISA法筛选出291孔能分泌抗盐酸克伦特罗的单克隆抗体，阳性率约 为80％。从中选出6株抗体采用有限稀释法进行3次克隆，经检测和筛选最终获得 了18株稳定分泌抗盐酸克伦特罗单克隆抗体的杂交瘤细胞株，体内诱生腹水并进行 定。 研究表明，三株抗体的亚类均为IgGl。细胞上清的间接ELISA效价分别为 3．28x10—8mol／L。E9一C11单抗对cL的IC。为6．1035ug／L；对沙丁胺醇的Ic。大于 吉林农业大学硕士论文 盐酸克伦特罗单克隆抗体的制备及特性鉴定 781．25lag／L，交叉反应性小于0．78％；对肾上腺素、去甲肾上腺素、异丙肾上腺 素、莱克多巴胺及部分维生素和抗生素均无交叉反应性。蛋白免疫印迹分析表明， 获得了三株高特异性抗盐酸克伦特罗的单抗。为进一步研究其作为免疫检测试剂奠 定了坚实的基础。 关键词：盐酸克伦特罗；ELIsA；单克隆抗体 吉林农业大学硕士论文 盐酸克伦特罗单克隆抗体的制备及特性鉴定 ofMonoclonaltoClenbuterol andCharacterization Preparation Antibody Abstract at ethanolthatl】∞beqa-2adrenomimetic Clenbuterol,asubstituted propertiesvery phenylamino low enhance doses．Itisused∞abronchodilatorinasthrn＆CLcall animal’s nutrition thefatto and alsoleadtothe ofmns