重组h3n2亚猪流感灭活疫苗及合成肽疫苗的初步研究.pdfVIP

摘 要 Influenza 猪流感(SwineInfluenza,SI)是由猪流感病毒(SwineVirus。SIV)引起的一种急 性、高度接触传播的猪呼吸道传染病，可引起病猪出现体温增高、食欲不振、呼吸凼难、咳嗽、 流产、延迟出栏等症状，严重危害着世界养猪业。猪的呼吸道上皮细胞同时具有禽流感病毒和人 流感病毒的受体，被认为是流感病毒由“禽．人”传播的重要中间宿主和新流行毒株产生的“孵育 流感最有效的方法是免疫接种，但现有疫苗存在抗原变异频繁、交叉保护力不强的问题。本研究 通过反向遗传技术获得鸡胚繁殖力较强的重组H3N2病毒，制各灭活疫苗并在小鼠上评价其免疫 原性和保护效力。此外，还将重组H3N2灭活疫苗与M2e分支肽疫苗共同免疫小鼠，发现M2e 分支肽显著增强了重组灭活疫苗的交叉保护能力，研究主要从以下方面开展： 本研究根据A型流感病毒基质蛋白(matrix protein，M)基因保守序列设计并合成特异性引物 和TaqMan 法敏感性、特异性和重复性良好，对40份实验感染样品的检测结果表明，与常规RT-PCR检测 方法相比，该方法灵敏度更高，特异性更强。此方法可应用于流感病毒的监测和致病机理的研究。 用疫苗”的理想靶标。本研究将4个拷贝的M2e通过赖氨酸与通用Th细胞表位偶联获得M2e分 欲减退、发热、颤栗等临床症状，并提供有效的免疫保护(保护率达100％)。上述结果给未来通 用疫苗的研究提供了一定参考。 H3N2亚型SIV在世界猪群中广泛流行，本研究利用反向遗传技术获得了鸡胚繁殖力较强的 毒株，制备灭活疫苗并在小鼠上评价其免疫原性和保护效力。此外，本研究还将重组灭活疫苗与 M2e分支肽共同免疫小鼠。结果显示：重组H3N2灭活疫苗免疫可刺激小鼠产生高滴度的HI抗 体和中和抗体，并能有效限制病毒在肺脏内的复制，对H3N2病毒的攻击能够提供100％的保护， 但其对异源病毒的交叉保护力较差；而添加M2e分支肽共同免疫能够诱导小鼠产生高水平的HI 体；M2e分支肽的添加显著增强了重组灭活疫苗对异源病毒的免疫保护作用，能有效限制SwGD96 致死性攻击可提供有效的免疫保护(保护率达100％)。鉴于以上结果，我们认为将M2e分支肽 加入灭活疫苗共同免疫可以作为未来流感疫苗研发的参考思路。 合成肽疫苗 关键词：荧光定量PCR，H3N2猪流感重组灭活疫苗， Abstract all Swineinfluenzais acute diseasecausedswineinfluenza leadsto respiratory by virus(SIV)，which a onsetof of abdominal and and fever，dullness，loss rapid high appetite，laboredbreathingcoughing harmstheswine alloverthe cellsare to thus bothhumanand industry world．Pig’Sepithelial susceptible asthe avianinfluenzavirusesandhavebeen intermediatehostsofinfluenzatransmissionfrom proposed avianto act vessels’’forthe ofnovel influenza huma