桔小实蝇电压门控钠离子通道基因cDNA克隆及其生物信息学分析.pdfVIP

中国农业科学 2012,45(19):3996-4003 Scientia Agricultura Sinica doi: 10.3864/j.issn.0578-1752.2012.19.011 桔小实蝇电压门控钠离子通道基因 cDNA克隆 及其生物信息学分析 蒋玄赵，魏丹丹，申光茂，豆 威，王进军 （西南大学植物保护学院昆虫学及害虫控制工程重庆市市级重点实验室，重庆 400715 ） 摘要：【目的】克隆获得桔小实蝇（Bactrocera dorsalis）电压门控钠离子通道基因 cDNA 序列，明确其典 型特征，为研究桔小实蝇抗性分子机理奠定基础。【方法】采用 RT-PCR 和 PCR 技术，克隆桔小实蝇钠离子通道基 因 cDNA 序列，利用相关软件对其序列进行生物信息学分析。【结果】克隆得到 1 条长为 6 446 bp 的 cDNA 序列， 包含 1 个 6 405 bp 的完整开放阅读框，共编码 2 134 个氨基酸。同源比对发现，桔小实蝇与果蝇（Drosophila melanogaster ，NP_001188635）和家蝇（Musca domestica，AAB47604）钠离子通道基因相似度分别高达91.7%和 86.9%，而与人的钠离子通道Nav1.2基因（Homo sapiens ，NP_066287）相似度为42.3%。所克隆序列包含昆虫钠 离子通道所有典型特征。【结论】成功地从桔小实蝇中克隆得到钠离子通道基因完整开放阅读框。该钠离子通道基 因存在丰富的选择性剪接，发现了 3 个可能与抗性相关的碱基取代。钠离子通道基因有可能发展成为一种昆虫系 统发育研究的分子标记。 关键词：桔小实蝇；钠离子通道；基因克隆；生物信息学分析；系统发育分析 Cloning and Bioinformatics Analysis of Voltage-Gated Sodium Channel Gene cDNA in Bactrocera dorsalis (Hendel) JIANG Xuan-zhao, WEI Dan-dan, SHEN Guang-mao, DOU Wei, WANG Jin-jun (Key Laboratory of Entomology and Pest Control Engineering, College of Plant Protection, Southwest University, Chongqing 400715) Abstract ：【Objective 】 The objective of this study is to clone voltage-gated sodium channel gene ( VGSC) from Bactrocera dorsalis (Hendel), and to identify its typical hallmarks. It will provide basic molecular information for clarifying insecticide resistance mechanism of B. dorsalis. 【Method 】 The cDNA sequence was isolated using RT-PCR and PCR methods. Based on the sequencing results, the bioinformatics analysis of nucleic acid and putative amino acid was conducted. 【Result 】An almost full-length cDNA sequence (6 446 bp) of VGSC was obtained, inc