大白猪opn基的克隆及其表达规律研究.pdf

摘要 化磷蛋白，归类于细胞外基质蛋白。有研究表明OPN在分泌期子宫内膜上皮细胞、侵袭的 滋养细胞、蜕膜腺上皮、胎盘上都有表达。且OPN在哺乳动物的母-胚界面持续表达，人们 推测OPN是影响子宫一胚胎微环境的重要因素。因此，应用现代分子生物学技术研究猪OPN 基因的分子遗传结构和时空表达，对研究猪的繁殖性状的候选基因具有十分重要的理论意义。 本研究以大白猪、野猪和野家杂种猪为研究对象，克隆了大白猪和野猪的OPN基因，对 其结构功能及分子进化进行了分析，并对大白猪和野家杂种猪的OPN基因在心脏、肝脏、 胃、脾脏、肾脏、肺脏、大肠、小肠、肌肉、子宫和卵巢的表达情况进行了比较分析。主要 研究结果如下： 通过克隆测序的方法克隆了大白猪和野猪OPN基因的全长cDNA序列，通过序列比对 发现，野猪的变异位点较大白猪群体内的变异位点丰富。通过对OPN基因的结构功能域的 分析发现，发现OPN蛋白仅有一个OPN特征性功能域，功能相对单一，对其进行系统发育 分析表明猪与牛、水牛、羊有较高的同源性，而鸡的变异程度稍大，处于进化树的末端。 半定量RT-PCR检测结果表明，大白猪OPN基因在不同生长发育阶段的心脏、肝脏、胃、 脾脏、肾脏、肺脏、大肠、小肠、肌肉、子宫和卵巢共11个组织中均有表达，但不具有明显 规律性，而在性腺组织中的表达表明OPN表达随着日龄的增加，逐步增高，270日龄达到高 峰，以后有所下降。OPN基因在不同日龄的大白猪和野家杂种猪的不同组织的表达情况不同。 而OPN基因在大白猪和野家杂种猪性腺组织表达来看都存在一个先高后低，以后达到高峰， 大白猪出现在270日龄，而野家杂种猪出现在360日龄。 采用Westernblot技术检测了大白猪不同组织的骨桥蛋白表达情况，结果表明不同组织 表达情况不同，心脏、肺脏、子宫表达70kDa和45kDa的蛋白，胃、肾脏、小肠表达70kDa、 45kDa和25kDa的蛋白而肝脏和肌肉只表达70kDa的蛋白。 利用诱导表达和RT-PCR相结合的方法，检测了在子宫内膜上皮细胞里添加不同的激素 对0PN表达的影响，结果发现孕激素正调控OPN基因的表达而雌激素负调控OPN基因的表 达。 关键词。大白猪；骨桥蛋白；克隆：RT-PCR；表达 VI And In OfOPN ClongingExpressingAnalysis Yorkshire Abstract ansecretion containsan Osteopontin(OPN)istypcglyeosylationphosphoprotein,which itisclassifieda oftheextracellular Arg-Gly-Asp(RGD)sequence，andcomponent matrix(ECM)． The researchfoundthatOPNwas ineellula uterine subsequent expressed epithelialis invaded ofdeciduaand in endomembrane，the cell，the trophoblasticglandularepithelium placenta thesecretion is onthematernal-fetalinterface phase．Furthermore，OPN continuously