山羊瘤胃微生物基因组文库的构建及功能基因的筛选.pdf

，T r ● _ lIIll l I IIllI I II Illl III Y1735072 摘要 自然界中存在着大量的微生物，能够在实验室中纯培养的种类微乎其微，这就大 大限制了人们对微生物的研究。宏基因组学可以在非实验室纯培养的条件下直接获取 环境微生物DNA，对其基因组进行分析并将其克隆到合适的载体上，筛选所需要功 能基因。为了研究山羊瘤胃微生物菌群降解纤维素酶的功能，本试验利用宏基因组学 kb 技术，从山羊瘤胃液中提取混合微生物DNA，经BamHI部分酶切后得到50～800 coli BAC载体上，转化EEPl300，建立山羊瘤胃微 的DNA片段，将其连接到pCCl I酶切后，经RFLP分析，该文库平均 生物BAC文库，共获得12672个克隆。用Not 插入片段为61 叶苷为底物的检测平板，进行B．葡萄糖苷酶的高通量功能筛选，获得了16个B．葡萄 I对 糖苷酶阳性克隆，对其中一个具有较高活力的阳性克隆进行深入分析，用Sau3A 阳性克隆进行部分酶切后，回收2～5 19载体上。转 kb之间片段进行回收连接到pUC 化到EcoliDH5a感受态细胞中，得到的阳性克隆，将其挑出培养成菌液，送至上海 基因组的纤维素酶基因。 关键词：山羊，瘤胃微生物，宏基因组文库，构建 Abstract not which Mostofthemicrobesin environmentsare culturable presentmany readily limits librarieswereconstructed theresearchof directly microorganism．Metagenomeby and DNAfromenvironmentaland to host extracting sampletransformingsurrogate ，． novelfunction orderto theeffectofthe ofcellulose screening genes．In study degradation t lumen mixe