日本柑桔黄龙病电镜观察及pcr检测.pdfVIP

日本柑桔黄龙病病原菌(Cand『dams Liberibacler) 电镜观察及PCR检测 中文摘要 柑桔黄龙病是由韧皮部杆菌Ca门嘶妇msLIber∞acter引起的一种柑桔毁灭 性病害，在多个国家与地区均有发生。该病在日本1988年于冲绳县遥表岛初次 发现，随后河野r1994年在冲绳本岛发现该病并确认，近年来在日本有向北扩 展的趋势，最近在鹿儿岛县奄美大岛也有发现。 自1970年Bove等用电镜观察到柑桔黄龙病病原以来，电镜观察一直是作 为‘种重要的鉴定和诊断手段，后来基于扩增16SrDNA特异性片断的PCR检 测方法成了柑桔黄龙病检溯的主要方法。 由于柑桔黄龙病病原只存在于韧皮部筛管细胞中，而对柑桔叶片维管组织 固定比较困难。本研究通过对材料细切，小心去掉木质部部分以便于固定。由于 植物组织中都含有一定的空气，致使树脂不能顺利浸润细胞器，这就给材料包埋 带来困难，这可以通过在预包埋过程中处以真空处理以抽出植物组织中的空气， 以便更好包埋。本研究对日本柑桔体内的柑桔黄龙病原菌的形态结构进行了电镜 观察，并与发生在其它地区的柑桔黄龙病的病原进行了比较，结果表明柑桔黄龙 病病原体存在于柑桔韧皮部的筛管细胞中，有时可见寄主细胞膜内陷成小泡状， 柑桔黄龙病病菌日本株系绝大多数是球形和短椭圆形，极少观察到长条形病原， 现的柑桔黄龙病病原体形态不同。本研究还对植物总0NA的提取过程和PCR PCR bead法可以快速、准确检测 扩增程序进行了优化，利用Ready-Tb—GoTM 到柑桔黄龙病病原体。 关键词：柑桔黄龙病，韧皮部杆菌属，PCR检测，电子显微镜 3 0f the 0f(黼s Mophologypathogen huang Jongbing in andit’s detection Japan PCR by AbstraCt CjfⅢs causedCanc打daf“s LIbe—bacIeris of by onethe HuangIOngbing severe mOst c抒，Us hasbeen in cOunt—esand diseases，which repOrtedmany areas．In obsen，ed was isfandof Japan，c舳sHuangfongbInginlhe IrIOmotein OkinawaandinthemainisIandofOkinawain1988 andin1994