水稻草矮病毒s基因转化水稻及其在水稻原生质体内的转录和表达.pdf

讨童孽#土，壤士幸幢话盘 摘要 水稻草矮病毒(Rice stunt grassy 的～个成员．在生物学性质及基因组结构等方面具有许多特性，是研究病毒 strandRNA， 与寄主互作机制的理想材料。RGSV含有6个单链RNA(singal ssRNA)片段，均采用双义编码策略，这在植物病毒中是很独特的。该病毒 的全基因组核苷酸序列已经测定，但对基因及其犏码蛋白的功能还知之甚 少。 SP(diseasespecific 种病害特异蛋白，该蛋白在寄主体内大量积累，但在带毒昆虫体内的表达量 很低，这说明该蛋白在病毒与寄主的互作中可能起着重要作用。本文通过转 基因技术，将RGSVSP基因转入水稻中，以期为研究该基因在病毒与寄主基 因的互作及其与病毒致病性的关系奠定基础；并通过病毒侵染顾生质体技 术．柬检测sP基因在寄主体内的转录和表达情况。 由张春嵋博士提供的植物表达载体．通过与动员质粒PRK2013和农杆菌 LBA4404进行三亲交配，将目的基因导入农杼菌中。分别利用未成熟胚、经 分裂扩繁的幼胚和成熟胚作为受体材料，进行愈伤组织诱导。这些受体材料 与含目的基因的农杆菌进行共培养后，在有选择压力的条件下进行筛选、分 基因已在植株体内进行了转录。对再生植株的初步观察没有发现与痛毒侵染 类似的症状。 为了进～步研究SP基因在寄主体内的表达周期，我们建立了水稻原生质 体培养体系．用聚赖氨酸介导的方法将提纯的RGSV接种到水稻原生质体 内，并利用地高辛标记制各的核酸探针，按不同时间取样，进行Northern点 果表明：sP在12h开始表达，32h达到最高值，随后逐渐降低。 关键词；水稻摹矮病毒；sP基因；转化；悬浮细艉I承稻厦生质体 再tt社土●焉tf值倍_之 2 Abstract Rice stunt memberofTenuiviruswithalot of grassyvirus(RGSV)，a unique and characteristicsin structure sixssRNA genomic biologicalproperty,includes whichhaveambisense thetotal ofRGSVhadbeen codingstrategy．Nowgenome isnot thefunction clear． determined，butofproteins Disease vRNA6ofRGSVis specificprotein(SP)encodedby gene presumed relatedtO isalso thatSPisaccumulated protein．Itreported possiblypathogenicity ricebutltitleaccumulatedininsect．ItshowstllatSPtakean ininfected important