牛卵母细胞冷冻存与体外孤雌培养技术研究.pdf

摘要 fertilization 随着体外受精．胚胎移植(Invitro embryo WF．ET)和冷冻 transplantation， 技术的发展，冷冻技术在动物种质资源的保存上得以推广应用，虽然卵母细胞的冷冻方 法在不断发展，但是由于冷冻后受到一定的损伤，对其后的发育会产生一定的影响。尤 其是卵母细胞在冷冻后，再进行孤雌培养是充分利用卵母细胞的一个重要部分。这对充 分利用屠宰场里大量的荷斯坦牛卵母细胞有一定帮助。本研究探讨了冷冻后卵母细胞的 成熟与孤雌激活，以及冷冻处理对孤雌激活的影响。本研究分为三个实验，研究结果如 下。 试验一不同冷冻方法对牛卵母细胞体外成熟及孤雌胚发育的影响 1．冷冻后卵母细胞形态正常率、卵裂率、囊胚率与对照组差异极显著(PO．01)， 卵裂率及囊胚率小于对照组，说明冷冻处理对卵母细胞有一定的损伤，对卵母细胞后续 的激活，培养均有一定的影响。本研究观察到，麦管法与OPS法差异极显著(Po．01)， OPS法冷冻的卵母细胞形态正常率、卵裂率、囊胚率均显著比麦管法冷冻要高，说明 OPS法可以有效地保护卵母细胞，保证其后孤雌激活，冷冻程序对卵母细胞造成的影响 较小(P0．05)。 2．冷冻后卵母细胞形态正常率、卵裂率、囊胚率与对照组相比，差异极显著(PO．01)。 而保护剂1与保护剂2之间差异不显著，但保护剂2比保护剂l的要高，说明保护剂2 对牛卵母细胞的保护能力比保护剂l效果要好，而保护剂l的卵母细胞卵裂率要略高与 保护剂2(PO．05)。 3．OPS法平衡温度38℃与25℃相比，差异不显著。在38℃时，卵母细胞形态正常 率、卵裂率、囊胚率均略高于25℃。实验结果表明，在38℃与25℃之间平衡温度，对 冷冻后卵母细胞孤雌发育的影响不大。本实验证实，38℃、25℃时与4℃相比，差异极 显著，当平衡温度明显降低后，会对卵母细胞的孤雌发育造成显著的影响，平衡温度不 宜低于25℃。在4℃时，冷冻后的卵母细胞激活后出现囊胚，实验结果表明低温平能温 度对孤雌发育的囊胚阶段有较大影响。 试验二不同培养条件对牛卵母细胞体外成熟及孤雌胚发育的影响 1．在成熟培养液中添加不同浓度卵泡液，发现：添加0％．20％的卵泡液，对卵母细 结果表明，在成熟培养液中添加10％，20％卵泡液对卵母细胞的成熟与随后的囊胚发 育有促进作用。 2．本试验分别用三蒸水和Mill—Q超纯水配制的培养液培养牛孤雌激活胚胎，结果 影响孤雌激活胚胎发育的关键因素，只要水质干净，符合培养用水就不会给随后的培养 造成较大影响。 试验三不同作用时间对牛卵母细胞体外成熟及孤雌胚发育的影响 1．试验结果表明，体外成熟24h一30h的卵母细胞，激活后卵裂率差异不显著 h或30h囊胚的 (P0．05)，但随着成熟时间延长，卵裂率有上升趋势。卵母细胞成熟28 发育率为(16．4％，15．3％)明显高于成熟24h或26 9．8％． h的囊胚发育率(10．5％， P0．05)。卵母细胞随着成熟时间的延长，卵母细胞得到较为充分的成熟过程，成熟卵 母细胞数量就会增多，这可能就是卵母细胞激活后囊胚率提高的另一个因素。 2．本实验研究结果证实，牛成熟卵母细胞用离子霉素激活5min，再用6-DMAP激 h 后，用5um ionomycin培养液激活5 为8h，囊胚发育率有下降趋势。表明6--DMAP作用时间对牛成熟卵母细胞的激活效率 以4．6h为’白：。 关键词：冷冻；损伤；牛卵母细胞；孤雌激活；荷斯坦牛 论文类型：B(应用研究) Abstract Withinvitro fertilization ferti