番茄高效离体再体系的建立与番茄coi1同源基因的转化.pdf

番茄高效离体再生体系的建立与 番茄coil同源基因的转化 摘 要 番茄 (LycopersiconesculentumMill)又称西红柿，为茄科 (Solanaceae)一 年生草本植物。由于其果实营养丰富，鲜美多汁、适应性强、产量高、用途广 泛，因而现己成为我国一种重要蔬菜作物，而且是生物学研究最多的模式植物 之一。但由于在栽培过程中番茄很容易受多种病虫害、干早、寒冷等影响，致使 种质严重退化、产量降低、品质变劣和抗性降低等。因此，如何改善番茄品质及 提高其综合抗性己成为人们关注的焦点。近年来快速发展的生物技术为番茄品种 遗传改良提供了新途径。 本研究以番茄常规品种CY-1,CY-2为试验材料，比较系统地研究了影响番 茄离体再生的诸多因素，如外植体的培养条件、外植体类型、外源激素种类及组 合、外植体生理状态等，建立了番茄子叶高效离体再生体系，从而为番茄的遗传 转化研究与应用奠定了基础。试验结果表明:浸泡、暗培养能获得较整齐一致的 子叶;不同激素组合及配比对番茄子叶不定芽再生有不同的影响，6-BA对不定 芽的再生效果明显优于Zt.CY-1,CY-2子叶在MS+2.0m叭6-BA十0.02m叭 IAA的选择性培养基上不定芽再生频率可达95%以上，平均每子叶再生芽数达4 个;同一基因型的番茄子叶再生效果比下胚轴好，而其中又以，d左右叶龄的子 叶再生能力最高，不定芽在MS+0.1mg/LBA+0.3mg/LIAA生根培养基中，生 根率达75%。 Coil基因是一个茉莉素调控基因，其调控植物育性和抗性。为了证明coil 基因介导的茉莉素信号途径在植物界的保守性并利用C口刀的同源基因。我们从 番茄EST:中分离出与coil基因高度重复的部分片段，然后以扩增产物作为探 针从番茄 eDNA文库筛选出番茄 Coil同源基因(tcoll)基因的全长序列。将 tc0“基因的全长序列插入到植物表达载体pROK2中，然后再将该载体转入农 杆菌AGIA 中，构建了(Oil同源基因的表达载体。通过农杆菌介导法转化番 茄品种CY-1.CY一后，对抗卡那霉素转化植株中进行PCR检测，结果发现转 化植株都扩增出目的带，初步证实目的基因整合到番茄染色体基因组中。试验通 过对农杆菌转化前外植体预培养、农杆菌侵染时间及转化后外植体共培养等方面 的探索发现，农杆菌介导的番茄基因遗传转化的最佳条件为:预培养1d一 共 培养3d* 农杆菌侵染时间为5min. 关键词:番茄;离体再生;盆C口刀基因:遗传转化 EstablishmentofHighEfficientPlant SystemandGeneticTransformation oftCOI1GeneinTomato Abstract Tomato(LycopersiconesculentumMill.)，whichisakindofannualherbageand belongstotheSolanaceaefamilyintheplantkindom.Therfuitscontainplentiful nutrientcontentsandrichersweetjuice.Itisoneofthemostimportantvegetablesand oneofthemodelplantswhicharemoststudiedinthebiology.However,thepresent problemthatthegermplasmbadlydegenerates,theoutputandresistancefalls,andthe qualitybreaksupresultsrfomtheeffectofthediseases，insectpest,droughtand chillinessinthecourseofthegrowth.Recently,moreandmoretechnicsofmolecular andcellbiologyincludinghighefficientplantregeneration,plantgenetic transformation,havebeenusedinthestudiesofimprovementofthequalityand diseaseresistanceintomato. ThetomatoCY-1andCY-