脂氢过氧化物裂酶的克隆表达、酶学性质及固定化研究.pdfVIP

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2016-02-28 发布于贵州
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脂氢过氧化物裂酶的克隆表达、酶学性质及固定化研究

目录摘要………………………………………………………………………………………………………………………。I Abstract……………………………………………………………………………………………………………………．．II 1．弓l言………………………………………………………………………………………………………………………．．1 1．1脂氢过氧化物裂解酶的研究进展……………………………………………………．1 1．1．1脂氢过氧化物裂解酶简介…………………………………………………………1 1．1．2催化机制……………………………………………………………………………1 1．1．3酶学性质……………………………………………………………………………．2 1．1．4二级结构……………………………………………………………………………3 1．1．5 HPL的亚细胞定位…………………………………………………………………3 1．1．6 HPL的分子生物学研究进展………………………………………………………．3 1．1．7HPL催化产物的生理功能…………………………………………………………4 1．1．8 HPL固定化的研究进展……………………………………………………………4 1．2本课题的立题依据和意义……………………………………………………………．5 1．3本课题的研究内容……………………………………………………………………．5 2．实验材料与方法……………………………………………………………………………。6 2．1材料与设备……………………………………………………………………………．6 2．1．1供试植物材料…………………………………．．．…………………………………6 2．1．2菌株与质粒…………………………………………………………………………6 2．1．3实验主要试剂………………………………………………………………………．6 2．1．4主要实验仪器………………………………………………………………………7 2．1．5培养基及试剂配制及灭菌方法……………………………………………………．7 2．2实验方法…………………………………………………………………………………。8 2．2．1马铃薯叶片中总RNA的提取……………………………………………………．8 2．2．2引物的设计…………………………………………………………………………．8 2．2．3RT-PCR…………．……………………………………………………………………………………………9 2．2．4重组质粒pMD-stHPL的构建……………………………………………………．9 coli coli 2．2．6基因工程菌EBL21(DE3)／pET-C-stHPL及EM15／pQE-N-stHPL的构建…．…．．．……．．…．．…………．．…．…．…．…．…．…．．………．…．．……．．…．．．．．…．………．…．…．……．…．…．．．…11 2．2．7重组脂氢过氧化物裂解酶的诱导表达……………………………………………11 2．2．8重组HPL的分离纯化……………………………………………………………12 2．2．9重组HPL的活性检测及挥发性产物鉴定………………………………………．12 2．2．10重组HPL的酶学性质研究……………………………………………………。13 3 2．2．11苋菜HPL的固定化……………………………………………………………。1 …………………………………．．14 …………………………………．．14 …………………………………．．14 …………………………………。14 …………………………………．．15 …………………………………．．16 …………………………………．．17 …………………………………．．18 ………．…………………………．18 …………………………………．．：!() …………………………………．．：11 …………………………………。22 …………………………………。23 ……………………