小麦染色体制片要点.pptVIP

小麦染色体制备方案 小麦品种 小麦取材部位 制备方案 中国春： （简称为CS）是一个非常重要的小麦地方品种，它被广泛应用于小麦遗传学研究 根尖 茎尖 胚芽鞘 优点： 根尖分生细胞区多为等直径的分裂细胞，其细胞质浓，细胞核大、细胞核体积约占整个细胞体积的3/4，是染色体制片的好材料 缺点： 破坏小麦生长 优点： （1）对小麦个体植株伤害小 （2）体积大、分裂相多，便于取材 （3）易于制片。木质化程度相对于根较低，酸解或者水解时处理时间相对缩短。 （4）染色体较大，杂质少，背景清晰 （植物染色体制片中疑难问题的解析_张羽） 缺点： 胚芽鞘见光即停止生长，实验处理需要遮光 优点： 与传统的根尖材料相比，利用茎尖生长点及幼叶等分生组织进行染色体制片，具有取材方便、来源充足等优点，这方面成功的例子很多。 （利用小麦茎尖分生组织进行染色体制片的探讨_李小军） 缺点： 需要较长时间等待长出幼叶，然后采用伸展3~5mm长的幼叶作为材料 1、材料预处理 2、材料固定 3、材料解离 4、制片 一、化学方法： 1、0.002mol/L的8-羟基喹啉在室温处理3~5h（董晓明等，2011；蔡文燕和周桃凤，2012） 2、饱和对二氯苯4℃处理1~2h（王胜等，2010） 3、0.1%~0.2%秋水仙素溶液温室处理2~3h（任琛等，2012） 二、物理方法 用冰水混合物（及低温）对材料进行预处理12~36h（时丽冉等，2009） 一、常用方法： 卡诺氏固定液固定（10倍于材料的新鲜卡诺氏液固定24h） 二、其他方法： 冰甲固定液固定20~24h（杨晓伶和程舟，2005）有毒，可侵害视觉神经网膜） 一、酶解法： 纤维素酶（1%~5%）和果胶酶（1%~2%）混合液，酶解前需要先将材料置于0.075mol/L的KCl溶液中低渗0.5~1.0h，然后加入酶液在25℃保温2~3h（候典云等，2011） 二、酸解法： 将材料用1mol/L盐酸在60℃恒温软化细胞壁，3~5分钟（郑金双等，2011；李娟娟等，2011） 一、常规压片法： 将材料分生区组织铺展于载玻片，然后用不锈钢刀片、镊子和解剖针钝头等工具轻轻敲打覆盖其上的盖玻片，使细胞和染色体分散开来。 二、涂片法： 将材料放在预先洁净冷冻的载玻片上，加一滴固定液，然后用镊子取根尖分生区组织，迅速将材料敲碎涂抹，并去掉大块组织残渣。然后从载玻片一侧向材料轻轻吹气，使组织分散成一薄层，涂抹的载玻片可自然或加热干燥（黄珊珊，2011） 三、悬浮液法J： 将材料用镊子夹碎、搅拌使其形成细胞悬液，然后将材料固定20min，视细胞沉淀后，用吸管轻轻吸去上清液，留1mL左右细胞悬液制备染色体标本。用吸管滴2~3滴细胞悬液在结晶载玻片上，将在不骗一端抬起，并轻轻吹气，使细胞迅速分散，然后在究竟灯火焰上微微加热烤干或自然干燥（候典云等，2006） 常规压片法 将材料分生区组织铺展于载玻片，然后用不锈钢刀片、镊子和解剖针钝头等工具轻轻敲打覆盖其上的盖玻片，使细胞和染色体分散开来。 涂片法 将材料放在预先洁净冷冻的载玻片上，加一滴固定液，然后用镊子取根尖分生区组织，迅速将材料敲碎涂抹，并去掉大块组织残渣。然后从载玻片一侧向材料轻轻吹气，使组织分散成一薄层，涂抹的载玻片可自然或加热干燥（黄珊珊，2011）