h5n1亚型禽感病毒ha1基因在大肠杆菌中的表达与纯化.pdf

摘要 禽流感是目前影响世界养禽业的最严重的疫病。血凝素蛋白(HA)是禽流感病毒最重要 的结构蛋白，占囊膜蛋自的90％，是诱导体液免疫的主要靶抗原，并且还能诱导细胞毒性T细 胞作用，另外HA备部分的抗原性和免瘦原性也有差别，研究表明，HAl的免疫原性以及抗原 性强于HA2。 豹HAl基因，对HAt基因按营酸序捌秘编弱豹氨基酸序列与基因瘁串已发表的彦剜 A／Goose／Guangdong／1／9 分别达到98a／卿97％，并且在HAl切割位点甜多个碱性氨基酸的插入序列，证明其为强毒株。 将HAl基因克隆至原核表选载体pGEX-4T-2，经酶切鉴定及PCR鉴定，证明成功构建了 菌BL21中得到大罐表达．经过4h表达量既达到高峰。融合蛋自GST-HAI的分子餐为62KD， 褴反应，表明该重组蛋自具有良好鲍抗原性。 鼹含有2mol／L寝4mol见尿素的包涵体洗涤渡洗涤包涵体，在37C条俘下，洗去了大部分 麓体疆白及其它核凝物质。用8mol／L尿素作为变性剂溶解包涵体，包涵体在8mol／L尿素中的 溶解性非常好。用梯度透析法对变性的融合蛋白GST-HAl进行楚性，在低蛋自浓度的条件下， 获得了很好的复性结果，复性前蛋白浓度为1．02mg／ml，复性后疆白浓度为O．875mg／ml。分别 糟亲和层析以及电洗脱两种方法对GST-HAl融合蛋白进行了纯纯，都获襻了理想的纯纯结采。 采用ELISA鸯法梭涮纯化后的融合蛋自韵抗原性。结果表明，该融合蛋白能同H5短型阳 键盘清发生特异链结合，荠越同H7、1-19簸墼AIV辩性血港没有交叉菠斑。说明该骚自其有缀 好豹拄原性和特男性。 关键词：禽漉感病毒，血凝素基因，表达，纯化 Abs仃act Avian aseriousdiseaseof the influenza(AI)is throughout poultry the surface ofA1 90％ofthe isthemost major glycoproteinV_representingenvelopeprotein．It in thevirus．In and importantantigendevelopingimmunityagainst addition，antigenicity onthe ofHA HAlisthe immunogenicitymay mostsuitable verydepend region expressed．and expressionregion． Inthis HAl of nA1Vwerecloned reverse study,The A／ChickerdGuangdong／2／97(H5N gene by chain andthe and transcriptionpolymerase designed reaction(RT-PCR)usingprimers sequences aminoacidswere withmolecular oftheHA1 of analyzed homog