prrsv感染猪肺泡巨噬细胞内源性抗原加工递呈功能影响的分子机制.pdf

摘要 猪繁殖与呼吸综合征是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)引起的以母猪繁殖障碍和 仔猪呼吸道疾病为特征的病毒性疾病。猪肺泡巨噬细胞(PAM)是PRRSV感染的主要靶细胞， 是主要的抗原递呈细胞。本文用PRRSV 内源性抗原加工递呈相关分子的mRNA转录动态和PAM表面MHCI类分子的表达变化，从分 子和基因水平揭示了PRRSV感染对PAM内源性抗原加工递早功能的影响。 用RT-PCR技术从PAM中扩增和克降了与内源性抗原加工递呈相关分子LMP7、UBP、 class Hsp70、Hsp90、MHC 鉴定后，府用倍比稀释的高纯度质粒，利用实时荧光定量PCR技术构建出各相关分子的标准定 量曲线和直线回归方程。 用实时荧光定量PCR技术分析了PRRSV体外感染PAM的内源性抗原加工递呈相关分子 mRNA的转录动态。结果表明，体外感染后UBPmRNA转录水平在48h内一直处于上调状态； class LMP7、Hsp70、Hsp90、MHC 水平均在感染后12h至48h之间被抑制，由此推测PRRSV感染肺泡巨噬细胞的内源性抗原加 工和递呈功能受到抑制。 t}=}jPRRSV感染30头仔猪后，采用实时荧光定晕PCR技术分析了不同时相PAM的内源性 处丁下调状态；MHCclass class 天被上调，7天和14天时均被F调，低于对照且差异显著，在28天时上调，MHCI的 到正常水平；calnexin在感染3天时显著上调，42天时恢复至正常水平。用流式细胞术分析了 类分子表达增强，随后下调，7天后其表达水平一直低于对照组，在28天时差异显著。由此说 明，PRRSV感染使猪肺泡巨噬细内源性抗原加工和递呈在感染早期受到严重抑制，后期有所恢 复，但未达到正常水平，提示PRRSV感染可导致PAM的内源性抗原加工和递呈能力下降，而 使机体特异性细胞免疫应答受到抑制，从而造成PRRSV在感染猪PAM中长期存在．引起持 续性感染。 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒；猪肺泡巨噬细胞；内源性抗原递呈相关分子；转录 Abstract Porcine and is characterized reproductiverespiratorysyndrome，which byrespiratory, disordersofsowand disease aviraldiseasecaused reproductive respiratoryofpiglets，is byporcine are and cellsofPRRSV target reproductiverespiratorysyndromevirus(PRRSV)．Thepredominately alveolar areessentialcellsfor the porcine antigenpresentation．Inpresent macrophages(PAIM)，which orderto theeffectofPRRSVinfectiononfunctionrelatedto and study,in explore processing in and