sla-dob因的克隆、原核表达及多态性研究.pdf

中文摘要 Complex，MHC)指集中于 主要组织相容性复合体(MajorHistocompatibility 某一染色体、编码与免疫应答直接相关的一类细胞膜糖蛋白基因群。其功能不仅限 于移植排斥反应，它还与机体对外源性抗原的免疫应答之间存在关联。近年来，基 于MHC基因在器官移植和免疫应答上扮演的重要角色，人们在人、鼠、绵羊、牛、 犬等物种上进行了大量的研究。猪SLA．DOB基因是参与SLAII类抗原递呈的一个 重要功能基因，但在国内暂没有看到对该基因的相关研究报道。有鉴于此，本文以 巴马小型猪、五指山小型猪、滇南小耳猪、合作猪、甘孜藏猪、荷包猪六个品种共 137头猪的耳组织样以及一头巴马小型猪的内脏器官为材料，运用生物信息学手段、 主要包括对该基因序列的获取、特性分析预测、组织表达及多态性等方面，为猪免 疫应答抗原递呈和相关基因多态性信息的后续研究提供一些有益的参考。主要研究 结果如下： ORF 其开放阅读框架推测编码277个氨基酸。为了验证电子克隆序列的正确性，在其起 始密码子区域和终止密码区域设计特异引物，经RT-PCR进行克隆、序列分析验证， o通过序列同源 结果表明与电子克隆序列完全一致(GenBank登录号为DQ333334 比对及系统发育进化分析，发现克隆到的序列与其它物种DOB基因具有很高的同 源性。应用生物信息学的方法对SLA．DOBl基因编码氨基酸进行蛋白质基本性质、 结构及功能预测，结果显示SLA．DOBl分子是一种具有信号肽序列，靠近N端末 端存在一个跨膜结构的MHCII类13分子前体蛋白。多序列同源比对发现， SLA-DOBl与小鼠、牛、兔子、绵羊、犬、黑猩猩、人的DOB核酸序列的同源性 分别为71％、77％、69％、79％、76％、77％、78％：与小鼠、牛、绵羊、犬、黑 ％。构建SLA-DOBl基因的分子进化树进一步揭示了猪与其它哺乳动物的进化关 系。 2．本研究构建了SLA．DOBl基因全编码序列的原核表达质粒，并进行了表达 达菌株)，IPTG诱导裂解菌体作SDS．PAGE分析，粗略得到融合表达蛋白特异条带， 3．巢式PCR检测SLA．DOBl基因在，Ii,、肝、脾、回肠、肾、胸腺、淋巴结中 表达。其中，该基因在脾脏、胸腺以及淋巴结中高度表达，其次在，Ii,脏、回肠、肾 脏和肝脏中有表达，而在肌肉中没有任何表达。 4．通过比对出的外显子区域设计了三对引物扩增出SLA-DOB的内含子1、2、 DGB基因的辫．显子2、3通过SSCP的方法对6品种猪群共137个体进行了群体多 第3外显子存在一定的程度的多态，基因多样性为O．897，核苷酸的多样性为 0．00710。本研究还对SLA，DOB基于等位基因间和物种间进行了初步的系统进化分 析和初步的命名。 关键词：猪SLA．DOB基因克隆表达功能分析多态性研究 and PolymorphismStudy Cloning、ProkaryoficExpression ofSLA—DoBGene LiBin ofAnimal (Cemer Biology Agriculture Technology,Sichuan China,625014) Abstract clusterthatlinkedwithceIttaiil Majorhistoeompatibilitycomplex(MHC)antigenⅧsuchgene chromosome ofcellmembrance response encodinga