柯萨奇病毒b组型vp1基因真核表达重组质粒的构建及免疫效果观察.pdfVIP

柯萨奇病毒B组3型VPl基因 真核表达重组质粒的构建及免疫效果观察 摘要 i目的：柯萨奇病毒B组(CoxsackievirusB，CVB)是 group 引起人类病毒性心肌炎、无菌性脑膜炎和新生儿全身性感染等 疾病的主要病原。CVB属于小RNA病毒科肠道病毒属，基因 组为正链RNA，全长7400碱基，共有6个血清型。由于CVB 型别较多，能引起保护性抗体的中和抗原均具有型特异性，使 用传统的疫苗预防几乎不可能。但基因疫苗为解决这一问题带 来了希望。CVB3是引起人类病毒性心肌炎的主要病原体之一。 根据国内外文献报道，CVB3的VPl蛋包抗原性较强，可以刺 激机体产生具有保护作用的中和抗体。体研究的目的，就是构 建CVB3VPl基因的真核表达重组质粒并观察其免疫效果，为 研制防治病毒性心肌炎的核酸疫苗奠定基础。 ／方法：从CVB3感染的HeLa细胞中提取病毒核酸，用自 行设计的CVB3 VPI特异性引物进行RT．PCR扩增，将扩增产 物与pCR—Blunt质粒连接，转化Topl0大肠杆菌，于含卡那霉 素的2YT培养基筛选重组子，提取质粒进行酶