模拟小鼠il-8天然生成的真核表达载体体系的构建及其生物学活性的初步研究.pdfVIP

中文摘要 模拟小鼠IL_18天然生成的真核表达载体体系的 构建及其生物学活性的初步研究 摘 要 目的：构建模拟小鼠IL．18天然生成的真核表达载 体体系。 厂 (方法：用RT—PCR方法从小鼠脾细胞的总RNA中 扩增出编码小鼠IL一18前体(mpro．IL一18)的基因，克隆至 T载体pCR4一TOPO后，再定向克隆至真核表达载体 pVRl012，构建成小鼠IL—18前体真核表达载体质粒 D转换酶mICE的基 pVRl012-mpro-IL．18；将小鼠IL．1 因从克隆载体亚克隆至真核表达载体pEGFP．N1，构建 成小鼠IL．1 t3转换酶真核表达载体质粒pEGFP．NI． mICE。将pVRl012．mpro—IL．1 8和pEGFP．N1．mICE单独 或共同转染COS一7细胞，用RT—PCR法检测两载体的 mRNA表达；用免疫印迹法检测转染细胞中IL一18蛋白 的表达；用ELISA法检测转染细胞培养上清中IL—18的 分泌；用3H．TdR掺