海带配子体cda消减文库的构建及雄性特异表达基因的初步筛选.pdf

上海水产人学 海带配子体eDNA消减文库的构建及雄性特异表达基冈的初步筛选 摘 要 A+ 从海带雌、雄配子体细胞中分别提取总RNA，分离纯化poly mRNA，反转录后，利用抑制消减杂交方法同时进行正、反向消减杂 交。该方法主要通过两轮消减杂交和巢式PCR扩增，富集海带雌、雄 配子体差异表达的eDNA片段，然后将获得的雄配子体特异表达的 coli) JMl09感受态细胞中，构建雄配子体特异表达的eDNA消减文库。经 蓝、白斑筛选，共得到750个白色克隆，随机挑选100个进行PCR扩 增鉴定，电泳分析表明插入片段大小在200～1000 bp之间。正向和反向 个克隆通过二轮斑点杂交筛选去除假阳性。最后随机挑选10个阳性克 隆测序，利用GenBank数据库进行同源性搜索，结果表明有7个片段 与已知基因序列无间源性，其中两个为