太平洋磷虾磷脂提取纯化及其酶法制备富含n-3多不饱与脂肪酸磷脂分析.pdf

万方数据 谨以此论文献给我尊敬的导师和我的家人 ——吕晴 万方数据 万方数据 太平洋磷虾磷脂提取纯化及酶法制备富含n-3 多不饱和脂 肪酸磷脂的研究 摘要 以DHA 、EPA 为代表的n-3 多不饱和脂肪酸 （n-3 PUFA ）具有重要的生理 功能，如增进视觉系统和神经系统发育、预防心脑血管疾病、抗炎作用等。n-3 PUFA 有两种天然存在的形式，甘油酯型和磷脂型。n-3 PUFA 甘油酯型产品因 n-3 PUFA 结合在甘油酯分子上具有一定的生理功能，一直受到人们的关注。然 而已有研究表明，n-3 PUFA 磷脂型产品在消化吸收、稳定性及生物利用度等活 性方面优于n-3 PUFA 甘油酯型产品。天然形式的n-3 PUFA 磷脂中，n-3 PUFA 通常含量较低，且其来源有限，因此对如何提高磷脂型产品中n-3 PUFA 含量的 研究十分必要，并且具有良好的开发应用前景。目前，酶法制备n-3 PUFA 磷脂 的研究对象主要集中在大豆磷脂和蛋黄磷脂上，罕见对海洋动物磷脂的研究。 本论文以太平洋磷虾为原料，首先研究了太平洋磷虾磷脂的提取纯化工艺， 其次以得到的太平洋磷虾磷脂为底物，研究了酶法制备富含n-3 PUFA 磷脂的工 艺，最后对产物磷脂的氧化稳定性进行研究。具体研究内容及结果如下： 首先，采用有机溶剂乙醇提取太平洋磷虾磷脂，同时通过单因素和正交实验 对提取工艺进行优化，再用丙酮沉降纯化磷脂，并对磷脂的主要组分进行分析。 结果表明，最佳的提取工艺条件为：乙醇浓度 95%，液固比 6mL/g，提取时间 4h ，提取温度40 ℃，在此最佳工艺条件下磷脂的得率为17.58%，纯度为46.09% 。 经过4 ℃丙酮沉降纯化后，磷脂的纯度提高到 78.85% 。通过高效液相色谱-蒸发 光散射检测器 （HPLC-ELSD ）分析磷脂的主要组分，结果表明，太平洋磷虾磷 脂中的主要组分包括磷脂酰胆碱（PC ）、磷脂酰乙醇胺（PE ），含量分别为75.92%、 11.28%。 其次，对太平洋磷虾磷脂与游离n-3 PUFA 之间的酯交换（酸解）反应进行 了研究，分别比较了不同酶、不同反应体系对反应的影响，同时通过单因素和响 应曲面实验对影响酸解反应的主要因素进行了优化，并将反应前后磷脂的脂肪酸 组成分析结果进行对比。最终确定以固定化磷脂酶A1 为催化剂，无溶剂反应体 系进行反应。得到反应的最佳工艺条件为：加酶量（以磷脂质量计）30%、反应 时间24h 、反应温度53℃、底物质量比（游离脂肪酸/磷脂）7.6 。在此条件下反 应后，经分析，产物磷脂中DHA 含量达31.05%，EPA 含量达 13.88% 。反应前 后太平洋磷虾磷脂DHA 和EPA 总含量由19.79%增加到44.93% 。表明本方法有 利于提高太平洋磷虾磷脂中n-3 PUFA 含量，可用于制备富含n-3 PUFA 的磷脂。 最后，对原料磷脂和产物磷脂的主要理化指标进行了分析，并分别探讨了温 I 万方数据 度、空气、抗氧化剂三个因素对产物磷脂氧化稳定性的影响。分析结果显示，产 物磷脂的酸值、碘值和过氧化值较原料磷脂均有所增加。研究结果表明，温度越 低，磷脂自动氧化程度越小，密闭条件比敞口放置更有利于磷脂的储藏，三种抗 氧化剂的加入对磷脂抗氧化能力提高的顺序为：TBHQ > VE > VC 。由此，富含 n-3 PUFA 的磷脂应低温、密封、添加适量TBHQ 进行储藏。 关键词：太平洋磷虾；磷脂；多不饱和脂肪酸；酯交换