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3-MA对人腮腺成纤维细胞Hs917.T放射敏感性的影响及其机制研究 中文摘要 中文摘要 目的：本研究主要通过药物3-MA抑制人腮腺成纤维细胞Hs917.T 中的自噬， 探讨3--MA对于Hs917.T细胞株放射敏感性的影响及其潜在的作用机制，拟为头 颈部放疗的体内模型研究提供一定的理论依据。 方法：（一）Westernblot法及GFP-LC3质粒转染法分析不同剂量X射线 （选 取0、2、4、6、8Gy5个剂量点）作用于Hs917.T细胞对自噬水平的影响；（二）3-MA 抑制自噬对Hs917.T细胞放射敏感性的影响及其机制：1、Westernblot法验证3-MA 对Hs917.T细胞内自噬相关蛋白的抑制效果；2、克隆形成实验分析3-MA联合X 线照射对Hs917.T细胞克隆存活率的影响；3、GFP-LC3质粒转染后荧光显微镜下 观察3-MA对受照后的Hs917.T细胞自噬凝集簇形成的影响；4、流式细胞术检测 3-MA对受照后Hs917.T细胞的凋亡影响；5、Westernblot法分析自噬相关蛋白LC3、 Beclin 1和凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax表达的变化。 结果：（一）X射线在0~8G 剂量范围内可诱导Hs917.T细胞自噬水平的上调， 且随着剂量的增加自噬水平也相应增加，呈现一定的剂量依赖性，后续实验选用 8G 作为处理剂量。（二）1、MTT结果显示2mM3-MA处理24h对Hs917.T细胞无明 显毒性作用，同时GFP-LC3质粒转染法及Westernblot法提示3-MA （2mM 、24h） 对自噬抑制效果明显，因此选择3-MA （2mM 、24h）作为后续实验研究；2、克 隆形成实验结果显示：Hs917.T单纯照射组和照射联合3-MA组的平均致死剂量D0 分别为2.36G 和1.97G ，准域剂量Dq分别为1.01G 和0.93G ，3-MA对Hs917.T细 胞的放射增敏比(SER)为1.20；3、GFP-LC3凝集簇实验结果显示：3-MA联合电离 辐射组相比于单纯照射组Hs917.T细胞内绿色凝集簇明显减少；4、AnnexinV-FITC 流式细胞检测结果显示，与单纯照射组相比，3-MA联合照射组明显增加Hs917.T 细胞的凋亡；5、Westernblot显示3-MA联合照射组与单纯照射组比较，Hs917.T细 胞内的自噬相关蛋白Beclin 1表达降低，凋亡相关蛋白Bax表达升高。 结论： 电离辐射（X射线）可明显诱导Hs917.T细胞内自噬表达增加；3-MA 可明显降低受照后Hs917.T细胞内的自噬表达，提高Hs917.T细胞的放射敏感性， 可能与3-MA增加受照后Hs917.T细胞内的凋亡表达相关。 关键词：自噬，放射敏感性，腮腺，3-MA 作 者：顾 培 指导老师：刘芬菊 I 英文摘要 3-MA对人腮腺成纤维细胞Hs917.T放射敏感性的影响及其机制研究 Thestudyonthefunctionsandmechanismsof 3-MA-inducedradiosensitizationonhumanparotid glandfibroblasts Abstract Object:In this study,human parotid gland fibroblastsHs917.T cellswere treated with an autophag inhibitor,3-MA. The potential mechanism of autophag inhibition-inducedradiosensitizingeffectswereinvestigated. Methods and Materials: To explore the role of autophagy, autop