c-ski基因小梁通道房水外流阻力的调控及机制研究.pdf

目 录 1 c-Ski 基因对小梁通道房水外流阻力的调控及机制研 究………………………………………………………………1 1.1 中文摘要………………………………………………………1 1.2 英文摘要………………………………………………………6 1.3 前言……………………………………………………………11 1.4 第一部分………………………………………………………16 1.5 第二部分………………………………………………………41 1.6 第三部分………………………………………………………59 1.7 全文结论………………………………………………………77 1.8 参考文献……………………………………………14,39,56,74 1.9 英汉缩略词对照表……………………………………………78 2 致谢……………………………………………………………79 TGF- β/Smads 信号传导通路在后发性白内障中的研究进展 3 （综述）………………………………………………………80 The triblock copolymers hydrogel through intracameral injection may be a new potential ophthalmic drug delivery with antiscaring drugs after glaucoma filtration surgery……………91 2 c-Ski基因对小梁通道房水外流阻力的调控及机制研究 摘 要 背景和目的： 原发性开角型青光眼(primary open angle glaucoma, POAG)是眼 睛疾病当中迟发性、进行性且不可逆的主要致盲眼病之一，目前其发 病机制尚未完全清楚，但一般认为眼压升高是其中主要的危险因素。 因此，降眼压一直是眼科治疗青光眼的主要手段。现今大多数降眼压 药物疗效不理想，且有一定的副作用。一旦患上青光眼就需要长期用 药，因此也存在高额费用及治疗的依从性不佳等问题。此外，就药物 作用机理而言，除胆碱能激动剂(如匹罗卡品)外，其他降眼压药并未 针对房水的主要排出通道即小梁通道起作用。因而，在目前降眼压治 疗存在许多问题的情况下，基因治疗的引入有特殊的意义。本课题将 TGF-β/Smad信号通路辅阻遏因子c-Ski基因导入大鼠前房，探讨c-Ski 基因表达对大鼠眼压的影响、可能的机制和转基因表达的副作用。以 上研究国内外尚无报道。该项课题可望阐明用c-Ski基因治疗青光眼的 可行性，为广大青光眼患者的治疗带来新的希望！研究目的包括： 1、构建c-Ski基因的慢病毒表达载体，在293TN细胞中合成和收 获病毒； 2 、慢病毒转导小梁细胞，探讨c-Ski在细胞水平的表达及其可能 的影响眼压机制； 3、将病毒一次性导入大鼠前房，观察c-Ski的表达对眼压的影响 3 及眼内毒性反应等，初步探讨c-Ski影响眼压的机制。 方法： 1.构建同时表达c-Ski和GFP基因的慢病毒载体(HIV-c-Ski/GFP)，并证 实在细胞水平上表达目的蛋白；仅表达GFP 基因的慢病毒载体 (HIV-GFP)作为对照，下同。包装成具有感染(转导)能力的病毒颗粒。 2. HIV-c-Ski/GFP 转导培养的人眼小梁细胞(trabecular meshwork cells,TMCs) ；观察转基因表达的时间及其对细胞形态、细胞外基 质、肌动蛋白细胞骨架及其细胞连接的影响。 3. 采用SD大鼠做实验。HIV-c-Ski/GFP转导大鼠眼，与对照相比，检 测转基因表达对眼压的影响，转基因产物在小梁通道表达及其对 小梁大体形态的影响，并观察可能存在的副作用如炎症反应等。 结果： 1、成功构建pCDF1-MCS2-EF1-copGFP-C-Ski表达载体，经酶切 和测序鉴定，仅有一处碱基改变，即第1476位