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CD133-2 在儿童B 系急性淋巴细胞性白血病发病中的作用及其机制初步研究 中文摘要 CD133-2 在儿童B 系急性淋巴细胞性白血病发病中的 作用及其机制初步研究 中文摘要 目的：探究CD133-2在儿童B系急性淋巴细胞白血病（B-ALL ）发病中的表达规 律、CD133-2+ 白血病细胞的生物学特性和调控该群细胞的信号通路相关分子，为鉴 定CD133-2是否为儿童B-ALL 白血病干细胞（LSC ）的一项标志和阐明其调控的分子 机制奠定实验基础。 方法： 1、流式细胞术检测42例初诊和复发的B-ALL患儿及10例对照组儿童的骨髓（BM ） 单个核细胞（MNCs ）的CD133-1、CD133-2表达，并观察其与临床预后指标的相关性。 2 、选取6例CD133-2 阳性表达(表达比例≥20%) 的B-ALL患儿的新鲜骨髓标本， 用磁珠分选（MACS ）分离纯化出CD133-2+CD19+ 、CD133-2+CD19-、CD133-2-CD19+、 CD133-2-CD19- 四组亚群细胞，进行体外含血清悬浮培养，观察其增殖能力，RT-PCR 检测融合基因的表达。对其中3例磁珠分选的四组亚群细胞行甲基纤维素半固体培养， 观察其集落形成能力。 3、采用实时定量PCR技术对3例B-ALL患儿的CD133-2+CD19-、CD133-2+CD19+ 、 CD133-2-CD19+、CD133-2-CD19-细胞亚群分别进行干细胞相关信号通路的基因表达 筛查，并重点分析CD133-2+CD19-细胞群的相关信号通路分子。 结果： 1、流式细胞术结果显示：CD133-1、CD133-2在B-ALL 中的表达水平明显高于正 常对照骨髓中的表达水平，差异具有显著统计学意义（P 0.01 ）；在B-ALL 中，CD133-2 的阳性表达率和表达水平均较CD133-1高，差异具有统计学意义 （P ＜0.05 ）；儿童 B-ALL 中CD133-2 的表达与患儿发病时的性别、年龄、初诊白细胞数、危险等级、融 合基因、细胞遗传学改变及完全缓解率等临床预后指标均无相关性。 I 中文摘要 D133-2 在儿童B 系急性淋巴细胞性白血病发病中的作用及其机制初步研究 2 、体外悬浮培养结果显示：CD133-2+CD19-细胞群在培养中呈倍数增长趋势， 在第6周时扩增了（117.9±72.51 ）倍（有10倍到226倍的扩增），而其他三组细胞未 出现明显的增殖，差异具有显著统计学意义（P 0.01 ）。一例初诊时E2A/PBX1融合 基因阳性的患儿，其分选后的细胞亚群经悬浮培养4周后，RT-PCR检测到E2A/PBX1 基因阳性仍存在于CD133-2+CD19-细胞群。 3、体外半固体集落培养结果显示：CD133-2+CD19-细胞群在培养后第7天时混合 集落（细胞数≥40 ）增长到（55 ±5.57 ）个，培养到第14天时达到（215 ±18.68）个； CD133-2+CD19+细胞在培养第7天时混合集落为（11±2.65 ）个，之后未再增多。而 其他两组细胞培养2周均未出现集落。各群细胞差异具有明显的统计学意义 （P ＜ 0.01 ）。 4 、实时定量PCR 检测结果显示：CD133-2+CD19- 细胞群为实验组与 CD133-2+CD19+ 、CD133-2-CD19+、CD133-2-CD19-三组对照组细胞相比，基因表达 差异主要分布于Wnt 、TGF β、FGF 、Hedgehog （Hh ）及Notch信号通路，主要涉及 TGF- β、Wnt和FGF信号通路中的BMPR1B 、SMAD6、SMAD9、RGMA、TCF7L2 、 FZD8及FGFR2等分子。 结论： 1、儿童B-ALL 中CD133-2异常高表达，它与患儿初诊时的性别、年龄、初诊白 细胞数、危险等级、融合基因、细胞遗传学改变及完全缓解率等临床预后指标均无相 关性。 2 、儿童B-ALL 中CD133-2+CD19-细胞群体外培养显示，其具有长期增殖和多向 分化能力，具备LSC生物学特性，可能是儿童B-ALL 的LSC表型标志。 3 、儿童B-ALL 的C