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着床相关蛋白的分离鉴定研究 中文摘要 研究背景：在哺乳动物中，卵母细胞受精是妊娠的开始，而孕卵埋入 子宫内膜的过程称之为着床，是生殖成功的关键步骤之一。IVF—ET技术 的开展与进步，给人类生殖障碍提供了良好的治疗机会，但成功率在≤ 35％的低水平徘徊，其中重要的原因是孕卵着床失败。研究发现，着床过 程主要包括胚胎与子宫内膜两个关键因素。子宫内膜只有在特定的时期 才允许着床，称之为“窗口期”：同时，胚胎必须在特定的发育阶段才能 与子宫内膜发生反应并着床，胚胎与子宫内膜的发育必须同步。胚胎的 植入与同种异体移植有着相似之处，但子宫内膜对于胚胎的容受性机制 至今未完全阐明。成功的着床与正常的胚胎一内膜微环境、激素水平及免 疫机制相关，这一过程主要由蛋白质发挥功能来完成。随着生物化学、 物理学、计算机技术的迅猛发展，研究从既往的单一蛋白质或细胞因子 的分析，发展到现阶段同时进行高通量蛋白组的研究。国内外已有多个 学者报道，通过现代蛋白质谱技术研究发现，发育中的胚胎在不同时期、 正常发育的胚胎与发育不良的胚胎都有不同的蛋白质谱的表达，着床成 功与失败的子宫内膜同样有不同蛋白质谱的表达，不明原因不孕症妇女 4 血清蛋白质谱与正常妇女也有着显著的差异表达。其中，多种差异蛋白 均与着床相关，对着床和／或着床障碍相关的蛋白质组学研究成为该领域 的一个方向，但是确切的机制至今未明。 并且，对于胚胎和子宫内膜的 研究是有创的操作，并涉及到生物伦理学的问题，因此，目前多是通过 动物模型来进行研究。 本课题的前一阶段试验中，已经利用CMl0芯片及飞行质谱技术对实 验组合对照组进行血清蛋白质谱分析，两组进行差异蛋白质比较。结果 发现，着床失败及着床成功组蛋白质谱有16种蛋白差异有显著性。对照 组与实验组相比，质核比为508IDa蛋白表达下降，质核比为5347Da、 5928Da、14575Oa、34910Da、32766Da、35067Da、36234Da、37743 Da、37942Da、40742Da、43984Da、41580Da、45847Da、32766Da Da、14575 Da、5347Da、5928Da的 蛋白表达上升。其中质核比为508l 四种蛋白表达丰度较高 研究目的t本实验希望利用2-DE电泳技术着重分离出质核比在 质点进行测序分析，进而确定蛋白质种类，试找出着床成功或失败的标 记物，并通过分析差异蛋白的功能，进一步了解着床的可能机制。 研究方法：本实验通过采集因输卵管因素不孕接受IVF—ET治疗的妇女 5 取卵并行配体移植后2天清晨空腹血液，制备为血清5ml并分装出20ul， 于-80℃低温冰箱保存。移植二周后采集患者清晨空腹血，测血B—HCG， 00 小于1 mlu／ml定为着床失败，为实验组；大于1OOmlu／ml者为着床成 功，定为对照组。利用2一DE电泳技术对比分离两组间蛋白质谱，分离出 蛋白测序。 实验结果： 两组进行差异蛋白质比较。结果发现，质核比在 珠蛋白前体(Haptoglobinprecursor，Hp 结论：本实验中，着床成功与失败患者围着床期血清蛋白质谱有显著性 差异，而且分离出了一种差异蛋白并测序证实为人结合珠蛋白／触珠蛋白 前体。根据既往的研究表明，该蛋白质分别在不孕与正常群体间、妊娠 与非妊娠群体间、正常妊娠与病理妊娠群体间均存在差异表达，并且， 在早期的血清检测中就可以特异性地反映着床的成败。可以进一步做成 相关抗体来检测患者血清中的含量，早期预测着床的成功性。也可以作 为引导，从分子水平研究不孕症的病理过程，进而寻找不孕症新的治疗 途径。 [关键词：着床，蛋白质谱，血清，体外受精一胚胎移植] 6 of Definitionon Research and Separation