糖尿病大鼠肺泡噬细胞tlr2的表达及对肽聚糖反应性的研究.pdfVIP

·中文论著摘要· 糖尿病大鼠肺泡巨噬细胞TLR2的表达及 对肽聚糖反应性的研究 目 的 肺脏作为糖尿病损害的靶器官本世纪70年代以来才逐渐被大家关注，广泛涉 及肺功能、生化代谢、肺组织病理等诸多方面，其中肺局部防御功能降低所致下 like 呼吸道感染最为常见。Toll样受体(Tollreceptors，TLRs)是近年来新发现的一种 同源于果蝇Toll的蛋白分子，在对抗细菌的先天免疫过程中发挥了关键的作用，并且 与糖尿病密切相关，现已日益受到关注。TLRs能够对病原体识别、结合，引发一系 列信号间的转导，促进各种炎性介质的释放。在这个大家族中TLR2和TLR4最为受 关注，TLI毪能识别许多病原菌相关分子模式，包括革兰氏阳性球菌的肽聚糖，此次实 验我们研究了肽聚糖刺激下TLR2在正常大鼠及糖尿病大鼠肺泡巨噬细胞表达，希 望能进一步了解糖尿病病人肺部免疫机能变化的机制，以期为感染和糖尿病的关 系提供迸一步的证据，并为糖尿病感染的治疗和控制提供新的作用点。 材料与方法 一、材料 --L 兑o (二)仪器与试剂：Universal 32R离心机、血糖仪、链脲佐菌素(sTZ)、肽 聚糖(PGNstaphylococcusaureus)、兔抗鼠TLR2 二、方法 N，体重约200克左 (～)动物模型制备及分组：将32支雄性健康WistarX 右，随机分为4组：正常对照组(A组，n：8)，糖尿病组(B组，n=8)，正常+PGN 素60mg／kg体重，正常对照组注射同等剂量枸橼酸-枸橼酸钠缓冲溶液，72d时后 1 随机血糖16．67mmol／L为糖尿病模型成功，以后每周复查1次血糖，连续观察4 周。 (二)肺泡巨噬细胞的获取及培养：大鼠用水合氯醛麻醉成功后，经气管 插管行支气管肺泡灌洗，回收BALF，巨噬细胞培养，C组及D组加入终浓度为10ug ／mlPGN孵育。 (三)免疫细胞化学染色：采用免疫细胞化学染色SABC法，染色时兔抗鼠 TLR2的浓度为1：200。阳性反应为胞膜和胞浆呈棕黄色着色。 (四)TLR2mRNA表达测定 (五)统计分析：采用SPSSl3．0统计软件处理，实验数据用i士s表示，各组 间指标比较用双因素双水平析因分析，P0．05为差异有统计学意义。 实验结果 一、免疫细胞化学结果 正常组大鼠肺泡巨噬细胞TLR2表达，以胞浆及胞膜为主呈较淡的棕黄色改 变；糖尿病组细胞TLR2在上述部位表达渐增多，颜色稍加深；正常+PGN组及 糖尿病+PGN组细胞的胞浆及胞膜呈深棕黄色改变，部分细胞变性坏死。平均光 1士0．01 密度值：正常组O．1146+0．002，糖尿病组0．173 1，正常+PGN组 0．2059+0．011， 糖尿病+PGN组0．2931+0．017。 二、TLR2mRNA表达 正常组O．898+0．084， 高，P(0．001，糖尿病及肽聚糖有较明显的主效应以及交互作用。 结论 糖尿病可促进大鼠肺泡巨噬细胞TLR2表达，使机体处于促炎症状态，将可 能导致免疫系统功能紊乱，使机体肺部的免疫防御功能下降。 关键词 Toll样受体2；糖尿病；肽聚糖 2 ● 英文论著摘要 ● oftoll--like 2in Expression alveolar receptor ofdiabetic