肿瘤坏死因子-对原代培养大鼠心肌细胞β3-肾上腺素能受体表达的影响及机制研究.pdf

目 录 一、摘要 中文论著摘要……………………………………………………………………”1 英文论著摘要……………………………………………………………………¨3 二、英文缩略语………………………………………………………………………·5 三、论文 i奇-耋…………………………………………………………………………………………………………”6 刖舌…………………………………………………………………………………………………………一 实验材料与方法…………………………………………………………………”7 实验结果(附论文图片)………………………………………………………12 讨论…………………………………………………………………………………………………………l8 结论………………………………………………………………………………·20 四、本研究创新性的自我评价………………………………………………………2l 五、参考文献…………………………………………………………………………22 六、附录 综述…………………………………………………………………………………………………………24 在学期间科研成绩………………………………………………………………·32 致谢…………………………………………………………………………………………………………33 个人简介…………………………………………………………………………34 ·中文论著摘要· 肿瘤坏死因子．0t对原代培养大鼠心肌细胞p3一肾上腺 素能受体表达的影响及机制研究 目 的 脓毒症时，体内肿瘤坏死因子．a(TNF．a)水平明显升高，并对心脏产生负性 肌力作用；而D3．肾上腺素能受体(133-AR)表达亦明显增高，对心脏起负性肌力作 用，与脓毒症心功能障碍有关。已有研究显示：TNF一0【处理心肌细胞后，B．肾上腺 中TNF．Ct的水平明显升高，加入TNF．a抑制剂可在一定程度上抑制心肌收缩力的 下降。同时，有研究显示：全身感染的患者体内一氧化氮(NO)水平明显增加，n师．0【 可刺激心脏组织合成释放NO，导致心肌受抑，并诱导心肌细胞凋亡，且可以降低 心肌细胞B一肾上腺素能受体反应性；而抑制NO后，心肌正性肌力作用增强，可见 性肌力作用，并抑制心肌收缩，导致心功能障碍；而NO会参与此过程，影响TNF．a 对133．AR的调节。 方 法 l、取生后2天SD大鼠，麻醉，消毒，开胸，取心，冲洗，取心室肌，剪碎。 用胰酶及胶原酶消化，收集上清离心，加培养基将沉淀吹打均匀，差速贴壁两次， 去除成纤维细胞，将未贴壁的细胞悬液放入培养瓶，隔日换液。行心肌细胞鉴定。 2、取第四天细胞进行实验：1)加入含不同浓度TNF．0【的培养液；2)加含 用。 3、real-time mRNA：按试剂盒说明操作提取总 RT-PCR检测心肌细胞p3．AR RNA；进行PCR扩增；根据荧光定量分析图，利用2。△△CT方法进行数据分析。 4、Western 蛋白电泳：进行转膜、封闭、抗体杂交；ELC发光 结 果 mRNA及蛋白水平变化一致： 心肌细胞受TNF—a刺激后，133．AR 蛋白的相对表达量增加，至作用浓度为1．6ng／ml，作用时间为12小时，其表达量 达峰值，后逐步减少。 参与TNF．a对心肌细胞133．AR的表达的调节。 结论 1、心肌细胞在n盯．0【作用下，133．AR上调，且有时间及浓度依赖性。 2、抑制NO合成可以抑制TNF．0【所致的心肌细胞133．AR上调。 关键词 心肌细胞、肿瘤坏死因子．Q、一氧化氮、p3．肾上腺素能受体 2 ·英文论著摘要· EffectsofTNF一仅on