体外冲击波对成细胞与破骨细胞共培养系中破骨细胞形成及活性影响的研究.pdf

目 录 中文摘要……………………………………………………………………………．1 英文摘要………………………………………………………………………………4 研究论文体外冲击波对成骨细胞与破骨细胞共培养系中破骨细胞 形成及活性影响的研究 前言……………………………………………………………………………………………．．8日IJ舌……………………………………………………………………………………………··a 材料与方法………………………………………………………………………8 结果……………………………………………………………………………．15 附图……………………………………………………………………………18 附表……………………………………………………………………………………………28 讨论……………………………………………………………………………………………．29 结论……………………………………………………………………………………………．34 参考文献……………………………………………………………………．35 综述 成骨细胞与破骨细胞的相互影响…………………………………38 致谢……………………………………………………………………………，……………………62 个人简历………………………………………………………………………63 嬲㈣缈 中文摘要 体外冲击波对成骨细胞与破骨细胞共培养系中破骨细胞形成及 活性影响的研究 摘 要 激在调节骨骼重塑和维持骨量方面具有重要的作用，以往研究已证明有效 力学刺激能促进成骨。破骨细胞是唯一具有骨吸收功能的细胞，它由来源 于单核／巨噬细胞谱系(monocyte／macrophagelineage)，通过多个单核的祖 细胞融合形成多核巨细胞。力学刺激对破骨细胞形成和活性的影响研究少 见。 Shock Wave，ESW)是由压力瞬间急剧变化 体外冲击波(Extracorporeal 产生的一种机械波，它产生的能量可经相应仪器二次聚焦形成高能量冲击 波，产生治疗作用。体外冲击波具有可定量作用于治疗部位、无创、并发 症少、治疗周期短、风险低等许多优势。实验研究发现适宜能量的冲击波 可以增加成骨细胞的成骨活性，进而促进骨折愈合。但冲击波作为一种能 量刺激形式，对破骨细胞的形成及骨吸收活性的影响，目前未见国内外有 相关研究。 本实验通过将体外冲击波作用于成骨细胞与破骨前体细胞共培养体 系，模拟破骨细胞在体内与成骨细胞相互作用的环境，通过观察破骨细胞 形成过程中的形态变化、RT-PCR分析形成过程中调控基因的表达水平、 ELISA检测破骨细胞特异性蛋白分泌水平及电镜下定量分析其骨吸收能 力，探讨冲击波对破骨细胞形成及骨吸收作用的影响。 方法： 1骨髓血分离hMSCs及成骨诱导：选择10名志愿者(排除代谢性疾病)， p． 甘油磷酸钠)经4周诱导，获得成骨细胞，ALP染色、茜素红染色验证成 骨细胞活性。 中文摘要 2成骨细胞和破骨细胞共培养体系建立：10名志愿者再次骨髓穿刺获得 marrow 骨髓血20ml，密度梯度离心法获得骨髓单个核细胞(bone mononuclear u 皿，培养液中加入O．1 为成骨细胞，上层为破骨细胞，大分子能相互影响的共培养系统。 3体外冲击波对共培养系中破骨细胞的作用：BMMCs贴壁后12小时， 续观察细胞形态变化，培养一周后ELISA法分析检测培养液中组织蛋白 酶K、抗酒石酸酸性磷酸酶5b、白细胞介素113，肿瘤坏死因