慢病毒介导的siRNA 沉默MRP4 基因增强急性髓系白血病对阿霉素的敏感性.pdfVIP

2011 年 第 56 卷 第 34 期：2865 ~ 2872 《中国科学》杂志社 论 文 SCIENCE CHINA PRESS 慢病毒介导的siRNA 沉默MRP4 基因增强急性髓系 白血病对阿霉素的敏感性 ①③ ② ③ ② ①④* 刘蓓 , 赵丽 , 马海珍 , 张炜 , 金玉 ① 兰州大学基础医学院遗传研究所, 兰州 730000; ② 兰州大学第一医院中心实验室, 兰州 730000; ③ 兰州大学第一医院血液科, 兰州 730000; ④ 南京大学医学院, 南京 210093 * 联系人, E-mail: jinyu@ 2011-04-10 收稿, 2011-06-20 接受 甘肃省科技厅自然科学基金资助项目 摘要 化疗是急性髓系白血病的标准治疗手段, 然而白血病细胞多药耐药的产生为白血病 关键词 化疗的主要障碍. 在耐阿霉素的K562 细胞株(K562/ADR) 中, MRP4 表达较不耐药的K562 细 急性髓系白血病 胞株明显增高. 本研究试图运用慢病毒介导的 siRNA 沉默 MRP4 基因后研究能否增强 慢病毒 K562/ADR 对阿霉素的敏感性. 首先设计并构建了 5 个针对 MRP4 基因的慢病毒介导的 siRNA MRP4 siRNA (lv-shRNAs-MRP4); 随后用荧光显微镜观察lv-shRNA-MRP4 感染K562/ADR 细胞的 K562/ADR 感染效率; 用real-time PCR 及Western blot 检测感染lv-shRNA-MRP4 后K562/ADR 细胞 MRP4 mRNA 及蛋白表达; 应用MTS 法及流式细胞术检测感染lv-shRNAs-MRP4 后K562/ ADR 细胞增殖活性及凋亡. 荧光显微镜观察结果可见, K562/ADR 细胞lv-shRNA-MRP4 感染 效率达到80% 以上; 相比较其他lv-shRNAs-MRP4, lv-shRNA1-MRP4 对MRP4 基因沉默效应 最强; 在K562/ADR 细胞中lv-shRNA1-MRP4 组mRNA 及蛋白表达均较对照组明显受抑; 联 合lv-shRNA1-MRP4 与阿霉素后K562/ADR 细胞生长受抑且细胞凋亡增加. 上述结果提示, MRP4 基因可能参与了 K562/ADR 细胞株多药耐药机制, 慢病毒介导的 siRNA 沉默MRP4 基因可增强急性髓系白血病对阿霉素的敏感性. 急性髓系白血病(acute myeloid leukemia, AML) 过结合 ATP 将药物泵出细胞外来介导耐药, 其过度 是以骨髓和/或外周血中幼稚细胞增多为特征的血液 表达常常导致肿瘤MDR 的产生. MRP4 是ABC 转运 系统恶性克隆性疾病. 在过去的 30 年中, 尽管联合 蛋白C 超家族成员, 其基因于 1999 年在T-淋巴细胞 应用阿糖胞苷加蒽环类抗肿瘤药物联合化疗后取得 系中首次被发现. MRP4 的特点是其转运底物涵盖范 了较好的疗效, 但 AML 患者总体预后仍较差, 其中 围极广, 包括抗病毒药物、抗生素、心血管药物及细 主要原因是白血病细胞多药耐药(multidrug resistance, 胞毒药物等, 而且还可作为一个新的治疗靶点调整 MDR) 的产生[1], 因此逆转白血病细胞的多药耐药成 复杂多样的病理生理过程及信号转导途径[4,5]. 研究 为治疗AML 的关键[2,3]. 多药耐药相关蛋白(multidrug 已证实, MRP4 而非MRP 家族其他成员,