核酸DNA转录探析.pptVIP

第一节 转录的基本特征 转录 ( transcription ) —— 生物体以DNA为模板合成RNA的过程 转录的基本特征 1、选择性转录 指细胞在不同的生长发育阶段，根据生存条件和代谢需要转录表达不同的基因，因而表达的只是基因组的一部分。 启动子（promoter）：指RNA聚合酶识别、结合和启动转录的一段DNA序列，具有方向性。 终止子（terminator）：DNA上与转录终止有关的序列。 增强子：能使与其临近的基因转录频率明显增加的DNA序列。 有义（+）链/编码链：在序列上与转录生成的RNA序列一致；一般报道的基因序列是此链的序列； 反义（-）链/模板链：作为转录的模板； 上游和下游：5’端一侧为上游，3’端一侧为下游；以编码链为准； 第二节 RNA聚合酶 1、共同特点： （1）直接合成，不需引物 （2）只转录模板链 （3）按碱基配对原则，忠实转录模板序列 （4）5’ →3’方向合成 （5）连续的过程 （6）可识别转录终止信号，终止转录 （7）无水解酶活性，无校对功能，错配率高 （8）可与基因表达调节蛋白相互作用，调控基因表达 第三节 与转录有关的调控序列 一、原核生物基因的启动子 Sextama框（－35序列）：RNA聚合酶识别位点。 Pribnow框（－10序列）：RNA聚合酶牢固结合位点。 两区相隔17nt时启动效率最高 三、原核生物基因的终止子 终止信号存在于RNA聚合酶已经转录过的序列之中。 分类：不依赖蛋白因子的终止作用； 依赖于蛋白因子的终止作用； 结构特点：在终止点之前有一段重复序列，两个反向重复部分（7～22bp）之间有一段不重复区段隔开，导致转录后产生茎环结构。 Two types of terminators in E. coli 终止效率与二重对称序列和寡聚U的长短有关，长度 效率 依赖?因子的终止 三、真核生物基因的终止子 1、mRNA：加尾信号：加尾位点 2、rRNA：18bp终止序列 3、tRNA：茎环结构等 第四节 原核生物RNA的合成 起始 延长 终止 后加工 一、转录起始 1、结合 RNA聚合酶全酶通过σ因子与启动子结合，形成闭合复合物 2、解链 RNA聚合酶全酶向下游移动，从-10区开始将DNA解开约17bp，形成开放复合物 3、合成 在RNA聚合酶作用下发生第一次聚合反应 5’-pppG -OH + NTP –? 5’ -pppGpN – OH + ppi 4、释放 合成8-9nt的RNA片段后， σ因子脱落，导致核心酶构象改变 二、转录延长 1、σ因子解离， RNA – pol 聚合酶核心酶变构，与模板结合松弛，沿着编码链5’→3’移动； 2、转录泡：DNA解链部分保持17bp，DNA－RNA杂交链维持约8bp； 3、DNA前方不断解链，后方重新缔合双链；新生的RNA链从杂交链中解离； 三、转录终止 ------ RNA聚合酶在DNA模板上停止前进，转录产物RNA链从转录复合物上脱落下来 四、转录后加工 原核生物的mRNA一经转录，通常立即进行翻译，除少数例外，一般不进行转录后加工。 原核生物的tRNA和rRNA都要经过一系列加工才能成为有活性的相应RNA。 第五节 真核生物RNA的合成 真核生物转录与原核生物转录的区别： 1、染色质和核小体结构对转录有深刻影响。 2、真核细胞RNA聚合酶高度分工。 3、转录的正常进行，除了需要RNA聚合酶以外，还需要许多被称为转录因子的蛋白质因子的参与。 4、启动子以外的序列参与调节基因的转录。 5、真核细胞内转录与翻译不存在偶联关系。 6、真核生物的转录产物多为单顺反子。 一、转录起始 真核生物的三种RNA聚合酶都不能单独转录基因，需要转录因子协助 TFIID是唯一能识别并结合TATA框的转录因子 二、转录延长 真核生物基因的转录延长与原核生物基因基本相同 TFIIF始终与转录复合物结合 转录延长因子参与 三、转录终止 真核生物mRNA转录终止与加尾同步进行 (一)mRNA前体 mRNA前体的平均长度是成熟mRNA的4-5倍 代谢速度快，半衰期短 (5-15分钟) 只有少部分加工成为成熟mRNA mRNA前体的加工方式主要有加帽、加尾、剪接、编辑和修饰 1、加帽（7-甲基鸟苷，倒扣一个“G” ） 5’端帽子结构：第一个核苷酸是7-甲基鸟苷酸m7G，通过5?-羟基与第二个核苷酸的5‘-羟基以5’，5’三磷酸酯键在原初mRNA的5’端与pppA或pppG相连，即 5?m7GpppGp — ( NTP ) n 帽子的作用 参与5外显子剪接 参与mRNA向细胞核外转运 是真核生物核糖体40S小亚基的识别和结合位点，参与蛋白质合成起始