核酸分子杂交副本探析.pptVIP

（1）Ⅱ2的基因型是_______________。 （2）一个处于平衡状态的群体中a基因的频率为q。如果Ⅱ2与一个正常男性随机婚配，他们第一个孩子患病的概率为_________。如果第一个孩子是患者，他们第二个孩子正常的概率为_____________。 （3）研究表明，世界不同地区的群体之间，杂合子（Aa）的频率存在着明显的差异。请简要解释这种现象。①_____________；②____________。 （4）B和b是一对等位基因。为了研究A、a与B、b的位置关系，遗传学家对若干基因型为AaBb和AABB个体婚配的众多后代的基因型进行了分析。结果发现这些后代的基因型只有AaBB和AABb两种。据此，可以判断这两对基因位于_________染色体上，理由是_______。 （5）基因工程中限制酶的作用是识别双链DNA分子的_________，并切割DNA双链。 （6）根据图2和图3，可以判断分子杂交所用探针与A基因结合的位置位于_______。 【答案】（1）AA或Aa （2） （3）不同地区基因突变频率因环境的差异而不同 不同的环境条件下，选择作用会有所不同 （4）同源 基因AaBb个体只产生Ab、aB两种类型配子，不符合自由组合定律 （5）特定核苷酸序列 （6）酶切位点①与②之间 * （四）斑点印迹杂交和狭线印迹杂交 Dot blotting and slot blotting 原理：是将被检标本的RNA或DNA变性后直接点样吸附于硝酸纤维膜上，然后用标记探针与之杂交。这种方法耗时短，可做半定量分析，一张膜上可同时检测多个样品。 优点：用于基因组中特定基因及其表达的定性及定量分析，方法简便、快速、灵敏、样品用量少。 缺点：不能鉴定所测基因的分子量，特异性不高，有一定比例的假阳性。 * * HPV FISH * 菌落原位杂交 菌落原位杂交是将细菌从培养平板转移到硝酸纤维素滤膜上，然后将滤膜上的菌落裂菌以释出DNA。将DNA烘干固定于膜上与32P标记的探针杂交，放射自显影检测菌落杂交信号，并与平板上的菌落对位。 * * 菌落原位杂交 下图为通过DNA分子杂交鉴定含有某特定DNA的细菌克隆示意图。下列叙述正确的是 A根据培养皿中菌落数可以准确计算样品中含有的活菌实际数目 B外源DNA必须位于重组质粒的启动子和终止子之间才能进行复制 C重组质粒与探针能进行分子杂交是因为DNA分子脱氧核糖和磷酸交替连接 D放射自显影结果可以显示原培养皿中含有特定DNA的细菌菌落位置 【答案】D 【解析】根据菌落数只能大约推测出活菌数，A错误；外源DNA作为一个完整的基因，自身含有启动子和终止子，B错误；DNA杂交是利用碱基互补配对原则进行的，C错误；因为放射性标记的DNA探针能与相应的DNA杂交，而产生放射自显影，而只有特定的DNA才与探针相结合，所以可以显示原培养皿中含有特定DNA的细菌菌落位置，D正确。 【试题点评】本题主要考查细菌培养和基因工程等有关知识，选修内容回归选择题，难度适中。 * 对引物进行电泳一定要使用变性PAGE电泳。由于引物是单链DNA，容易形成复杂的立体结构，因此进行Agarose电泳时，容易出现多条泳带，更无法用Agarose电泳进行定量了。 能否根据引物电泳后EB染色后条带的亮度对合成的引物进行定量?不能。因为EB是通过嵌入到核酸的双螺旋间而使其着色的。合成的DNA分子为单链，只有通过自身回折形成局部发夹环结构或链间形成部分双螺旋结构，才能被EB染色。由于不同引物的序列不同，形成双螺旋的能力不同，因此染色能力不尽相同，也就不能根据EB染色带的亮度来对合成的DNA进行定量。  * 分子生物学 Molecular Biology 核酸的分子杂交 Nucleic Acid Hybridization Department of biochemistry and molecular biology * Content of Table 一、核酸的检测 二、核酸分子杂交技术的原理 三、核酸探针的制备 四、核酸探针的标记 五、核酸分子杂交技术 * 一、核酸的检测 包括DNA的质量、大小、纯度检测 * 凝胶电泳技术 样品的物理性质 分子大小、电荷、空间构型 支持物介质 琼脂糖，100-60000bp, 聚丙烯酰胺，1-500bp 电场强度，5V/cm 缓冲液离子强度 TAE, TBE, TPE * 操作过程 * DNA分子大小的检测 NEB，1Kb DNA Ladder：3kb=62.5ng， 1kb=21.0ng PCR产物 3Kb 1Kb * 一、核酸分子杂交技术的原理 有互补特定