外源生长素和多胺对M-%2c26-试管苗不定根发生效应研析.pdfVIP

摘要 oIJs 不定根(adventiti r00t)的形成是植物发育生物学中一个重要而基本的 问题，对离体繁殖血同样具有重要意义。不定根形成经历了脱分化和再分化的 过程，是通过基因调控发生的。基因功能的执行体一功能性蛋白在此过程中起 着重要的作用。激素和多胺与基因选择性表达、遗传物质合成和器官分化等都 有密切关系，可作为不定根形成过程的调控因素。本试验以节果砧木M。试管苗 为试材，研究了外源IBA和外源spd对M。试管苗生根过程中蛋白质组成、内源 激素和内源多胺动态变化的影响，主要试验结果如下： 1．M。试管苗茎基部未发现潜伏根原基，不定根原基由诱生根原基发育形成， 诱生根原基源于维管形成层部位细胞的分裂和分化。解剖学观察表明M：。试管苗 诱导生根的过程可划分为：(1)细胞脱分化时期；(2)不定根原基形成时期；(3) 不定根的分化形成期。 2．10～～lO—molt Ll外源多胺处理对M。试管苗生根有不同程度的促进效应， mg·一+IBAO．3mg·一生根培养效应相近。Put处理侧根长势优于Spd、spm处理 和对照，其中以1×10…’mol·一处理的侧根最为发达。 mg·L．。+IBAO．3mg·一生根培养基其生根效果优于直接接入。生根指数表明， 100mgtLlIBA浸泡24h为最佳，经此种处理的试管菌生根能力最强。 4．sDs～聚丙烯酰胺凝胶电泳分析发现，诱导生根|ji『后M。试管苗茎基部的 kDa、 可溶性蛋白的表达发生了变化。生根培养后有五条蛋白条带(26．8kDa、37 kDa kDa、27．7 和55．5kDa)表达丰度提高，同时明显表达了四条新的分子量分别为26 kDa、32．5 kDa、和45kDa的蛋白条带。生根过程中，三条蛋白条带的表达丰 度随生根培养时间的延长而逐渐提高。进一步研究表明，分子量在32．5KDa和 55KDa附近的蛋白条带中包括与生根相关的特异蛋白。 5．100mg·L“IBA浸泡M。试管苗茎基部不同时问，其可溶性蛋白的表达存在 差异。处理12h时，茎基部有66kDa和43kDa两条特异蛋白条带明显表达。处 理16h和20h，茎基部蛋白的表达情况基本相同，且与生根培养五天时的试管苗 kDa和27kDa小分子量蛋白 茎基部可溶蛋白的表达情况相似，同时还有28．5 表达丰度较高，与生根培养五天时的蛋白表达有区别。处理24h，42kDa蛋自带 表达丰度明显降低，27kDa蛋白带表达丰度提高，同时有特异蛋白带40．3kDa 和36kDa开始表达。外源spd处理同样引起了M。试管苗茎基部可溶性蛋白的变 化，随处理时间的延长，有三条蛋白条带消失同时有五条新蛋白开始表达，还 有蛋白条带随处理时间其丰度呈现动态变化。spd诱导表达的42．9kDa特异蛋白 条带被TBA所抑制，而IBA诱导的36．3kDa蛋白条带不能被spd抑制。 有1．0mg·一IAA的1／2Ms培养基中培养五天，sDS电泳分析发现，二者可溶性 蛋白表达存在差异。IBA处理后有36．3kDa和28kDa二条条带是spd处理没有 表达的，同时43．9kDa和37．6 kDa二条带的表达丰度高于spd处理。 7．利用IEF电泳分析M。。试管苗茎基部全蛋白结果发现，继代培养、IBA处 理和Spd处理后在pH6．9～7．6范围内蛋白表达存在差异，即差异蛋白的等电点 在pH6．9～7．6范围内。 8．外源IBA和Spd处理使M。试管苗内源激素含量有不同程度的变化。二处 理均极显著提高了内源I从峰值的含量。Spd处理的内源ABA含量变化最为活跃， 呈双峰型，其含量极显著高于对照，陋IBA处理后的内源ABA含量却低于对照。 IBA和spd处理使内源ZR和GA、。含量与对照相比极显著下降，且二二处理的变化 趋势一致。