柞蚕丝素-壳聚共混膜与大鼠颌下腺细胞体外复合培养的研究.pdf

·中文论著摘要· 柞蚕丝素-壳聚糖共混膜与大鼠颌下腺细胞体外 复合培养的研究 目 的 探讨大鼠颌下腺细胞与柞蚕丝素．壳聚糖共混膜(Anthemeasilk pemyi fibroin．chitosan films)体外共培养的可行性，为组织工程化涎腺 films，ApSF．CS 样结构的体外构建提供理论基础和实验依据。 方 法 submandibular 取O．8d龄SD大鼠的颌下腺，对大鼠颌下腺细胞(rat glandcells， RsMGs)进行原代培养、分离纯化、传代；用抗细胞角蛋白单克隆抗体(CK8) 及淀粉酶抗体(amylase)的免疫细胞化学染色鉴定细胞来源。 morisilk 以ApSF．CS组为实验组；桑蚕丝素一壳聚糖共混膜(Bombyx fibroin-chitosanfilms，BmSF．CS films)组、壳聚糖组(ehitosanfilms)为对照组； 种于实验组和对照组的支架材料上。 扫描电镜、荧光显微镜观察实验组与对照组细胞支架复合生长情况；分别于 接种后l、4、8、12、24h检测实验组与对照组细胞在支架上的黏附率；MTT比色 法检测实验组、对照组及阴性对照组细胞的增殖能力；Amano法测定上清液中淀 粉酶含量，检测实验组、对照组及阴性对照组颌下腺细胞的分泌功能。采用 SPSSl3．O统计软件对数据进行相关分析，计量资料用(x士s)表示，组间差异比 较采用方差分析，检验水准a=O．05，以PO。05为差异有统计学意义。 结 果 l、细胞形态和表型特征 免疫细胞化学染色观察：上皮细胞特异性抗体CK8染色阳性，腺泡上皮细胞 特异性抗体amylase染色阳性。扫描电镜观察：实验组和对照组各支架呈现网状 结构。ApSF．CS组细胞植入初期时，表面呈现圆球形，尚未向支架伸出足丝；随共 培养时间的延长，细胞表面可见明显凸起的微绒毛样改变，细胞在支架表面向各 个方向伸展并向支架材料伸出伪足，呈现平铺状生长，而且细胞与细胞问彼此伸 出伪足相连。荧光显微镜观察：随着共培养时I’日J的延长，ApSF．CS上锚定的种子 细胞数量增多；RSMGs细胞核边界清楚、形态呈圆形或椭圆形，核仁清晰可见： 细胞较均匀的散布生长在支架材料上，生长良好。 2、粘附率检测 随着培养时间的延长，实验组和对照组支架材料上的细胞黏附率均有增大的 存在显著性差异(PO．05)。接种后lh，三组材料上细胞附着都较少；24h后三 组材料的黏附率都达到95％以上，各组材料之间相比未见显著性差异(P0．05)。 3、细胞增殖能力的检测 对照组的OD值之间存在显著性差异(PO．05)。接种后ld，实验组和对照组材 料上细胞增殖较少且无差异(P0．05)，但均高于阴性对照组(P0．05)。第9d 时，OD值开始下降，细胞活力开始降低，实验组和对照组材料之间相比没有显著 性差异(P0．05)，但二者与阴性对照组有显著性差异(PO．05)。 4、淀粉酶含量的检测 随着复合培养时间的延长，实验组、对照组及阴性对照组细胞培养上清液中 照组都与阴性对照组有显著性差异(P0．05)。 F匕： 自目结论 ApSF．CS支架对于RSMGs具有较好的细胞相容性；它作为体外构建的组织工 程化涎腺样结构的支架材料，值得进一步研究。 2 关键词 组织工程；颌下腺；柞蚕丝素；桑蚕丝