博士研究生课高级生物化学与分子生物学专题mRNA分子的选择性剪接黄东阳.ppt

mRNA 分子的选择性剪接 黄东阳 汕头大学医学院 前言 很多细菌和所有的真核细胞的RNA分子在合成后都需要某种程度的加工处理（processing)。RNA代谢中一些最令人感兴趣的分子变化就发生在这合成后的加工过程中。这包括一系列复杂的反应过程。其中剪接与选择性剪接的生物学意义越来越引起人们的广泛注意，观念不断更新，认识不断深入。 RNA催化内含子剪接 有两种内含子（group I and group II)尽管剪接机制在细节上有别，但共享一特点——自我剪接（self-splicing)，没有蛋白质的参与。 Group I 内含子存在于核、线粒体和叶绿体基因，编码rRNA、mRNA和tRNA。 Group II内含子多见于真菌、藻类和植物线粒体和叶绿体mRNA的原始转录本。 偶尔也可在细菌中见到group I 和group II内含子。 两种剪接都不需要高能辅助因子如ATP等，但都有两步转酯（基）反应（transesterification）。 剪接体的剪接 大部分剪接是依赖剪接体（spliceosome),这类内含子称为剪接体内含子（spliceosomal introns)。 剪接体：由一些特殊的RNA-蛋白质复合体——小核内核糖核蛋白（small nuclear ribonucleoproteins，snRNP, 常发音为snurps) 与一些其它蛋白质构成。 每个snRNP含有一个100-200核苷酸长度的小核内RNA（small nuclear RNAs, snRNAs)。 真核细胞细胞核内比较常见的剪接体snRNA有5种，因富含U，故称U1,U2,U4, U5和U6。每种snRNA至少与7个蛋白质亚单位（共约50种蛋白）构成复合体snRNP ，这是一些从酵母到人类都高度保守的核酸和蛋白质序列。 mRNA的选择性剪接 真核细胞基因表达所转录出的mRNA的剪接过程中，参加拼接的外显子可以不按其在基因组的线性分布次序拼接，内含子也可以不被切除而保留，即一个外显子或内含子是否出现在成熟的mRNA分子中是可以选择的，这种方式叫做选择性剪接（alternative splicing)。选择性剪接可以使同一基因产生不同的蛋白质。选择性剪接违背了一个基因一个多肽的原则，使一个基因产生了诸多的蛋白质亚型。因此在产生复杂蛋白质组学方面具有重要作用。 当一个转录本的多个位点存在多种不同的剪接方式时，一个基因可以产生数十种不同的蛋白质分子，果蝇的一个基因（Dscam,一种细胞表面蛋白)甚至可以产生38000种不同的蛋白质。 40-60%（EST 和cDNA datasets)，也有报道高达73%(microarray+EST)的人类基因有选择性剪接。 SR蛋白质 因构成RNA的核苷酸仅有4种，5’，3’剪接位点或分支点等关键序列以外，与之重复序列存在的可能性很大。因此，正确的识别还需要许多其它蛋白因子，包括一类蛋白质家族——SR蛋白的参与。SR蛋白结构特点是含有一个RNA识别、结合区域和多个蛋白质相互反应区域， C端富含不同长度serine-arginine的蛋白质，与剪接密切相关。 当与外显子的剪接增强子序列结合时，SR蛋白通过跨越外显子的蛋白质相互作用网络，正确地介导U1 snRNP向5’剪接位点，U2snRNP向分支点A结合。 在外显子上组装的SR蛋白质，snRNP和其它剪接因子（U2AF等）的复合体称为跨越外显子识别复合体（cross-exon recognition complex)。据此，可以对长长的前体mRNA分子的外显子进行精确的特定。 剪接异常与疾病 The EJC functions as a molecular signal to trigger NMD, since the presence of a PTC causes the ribosome to terminate prematurely, leaving downstream EJC marks that are not removed from the mRNA, which in turn recruit the NMD machinery and trigger mRNA degradation. DHRS4基因的进化 辅酶II依赖性视黄醇脱氢/还原酶选择性剪接亚型B1在Hela 细胞中的分布 图中绿色荧光为GFP融合的辅酶II依赖性视黄醇脱氢/还原酶选择性剪接亚型B1(NRDRB1)，显示 NRDRB1在Hela细胞内的分布。红色荧光显示Hela细胞中过氧化物酶体分布。该图说明NRDRB1部分 定位到过氧化物酶体。(引自宋旭红,黄东阳等,International Journal of Cancer 2007年120卷第8