人教选修专题课题多聚酶链式反应扩增DNA.pptVIP

PCR技术 的原理——DNA复制 利用DNA分子的热变性原理，通过控 制温度来控制双链的解聚与结合。 体外DNA复制的条件： 四种脱氧核苷酸、耐高温的聚合酶、引物、 模板；缓冲溶液和严格控制温度的温控设备。 复制的方向：子链的5’ 端向 3’端延伸。 PCR的反应过程 PCR的基本原理 PCR反应条件 PCR过程 PCR的特点 PCR的基本原理 PCR反应条件 PCR过程 PCR的特点 PCR的基本原理 PCR反应条件 PCR过程 PCR的特点 三、实验步骤： * * * 课题2 多聚酶链式反应扩增DNA片段 解旋酶 DNA母链 4种脱氧核苷酸 DNA聚合酶 引物（ RNA） 打开DNA双链 模板 合成子链原料 催化子链合成 使DNA聚合酶能从引物3’端开始连接脱氧核苷酸 体内DNA复制的条件是什么？ 体外扩增DNA 如何提供相似环境？ 变性（ 80-100℃ ） Taq聚合酶（耐高温） 15—30个核苷酸构成DNA或RNA 体外扩增 思考： 1。DNA分子有哪些结构特点？ 2。组成DNA的脱氧核苷酸链的3′端和5 ′端 如何确定的？ 3。DNA复制时为什么需要引物？ 4。合成新链的方向是怎样的？ DNA双链 单链 变性（加热80-100℃ ） 复性（缓慢冷却） DNA复制的过程和特点？ 变性的目的： 复性的目的： 解开双链 有利于引物Ⅰ和引物Ⅱ与两条单链的结合 变性 ——复性——延伸 1、PCR扩增的DNA序列长度是固定的吗？如何保证？ 2、 PCR扩增的DNA碱基序列是固定的吗？如何保证？ 模板DNA 95℃ 50℃ 引物1 引物2 DNA引物 引物1 引物2 DNA引物 72℃ Taq酶 Taq酶 第1轮结束 95℃ 第2轮开始 50℃ Taq Taq Taq Taq 72℃ 第2轮结束 准备好PCR反应体系的配方 用微量移液器按配方在往微量离心管中加入各组分 盖严盖子，用手指轻轻弹击管壁混合反应液 离心10分钟 将离心管放入PCR仪上，设置好循环程序进行反应 72℃ 94℃ 55℃ PCR循环 PCR技术与体内DNA复制的区别： 1. PCR不需要解旋酶；体内DNA复制需要； 2. PCR需要耐热的DNA聚合酶（常用TaqDNA聚合酶），而生物体内的聚合酶在高温时会变性； 3。PCR不需要ATP提供能量 1、关于PCR技术的应用，错误的一项是 A 古生物学、刑侦破案、DNA序列测定 B 诊断遗传疾病、基因克隆、古生物学 C DNA序列测定、基因克隆、刑侦破案‘ D 诊断遗传疾病、合成核苷酸、DNA序列测定 2、DNA复制需要引物的主要原因是 A 加快复制速度 B 引物可与DNA母链互补配对 C 引物的5′端有助于DNA聚合酶的延伸DNA链 D DNA聚合酶只能从3′端延伸DNA链 3、一个由32P标记的DNA分子，放在未标记的环境中培养，复制5次标记的DNA占DNA分子总数的 A 1/10 B 1/16 C 1/25 D 1/32 4、PCR过程中的变性、复性、延伸三步的温度分别是 A 95℃、55 ℃ 、72 ℃ B 72 ℃ 、50 ℃ 、92 ℃ C 50 ℃ 、92 ℃ 、72 ℃ D 80 ℃ 、50 ℃ 、72 ℃ *